Проблемы серологической диагностики сифилиса. Интерпретация результатов серологических исследований. Современные лабораторные методы и алгоритмы диагностики сифилиса Выявление и порядок диагностики сифилиса
Сифилис – заболевание инфекционной природы, обусловленное спирохетой Treponema pallidum, склонное к прогредиентному хроническому течению, с чёткой периодизацией клинической симптоматики.
Преобладание полового пути передачи над контактным и трансплацентарным ставит это заболевание в ряд венерических (ЗППП, ИППП). Помимо указанных способов передачи инфекции особую роль играет артифициальный путь (от лат. «artificio» - искусственно созданный).
Он характерен для медицинских учреждений, в основном, реализуется в условиях стационара. Инфицирование происходит при гемотрансфузиях, различных хирургических операциях, инвазивных диагностических методах.
Несмотря на карантинизацию донорской крови, проблема выявления сифилиса у доноров на разных стадиях заболевания все ещё актуальна.
Поэтому диагностические мероприятия при сифилисе требуют стандартизации, внедрения новых чувствительных и информативных методов идентификации, а также сведения к минимуму ошибок и неправильной трактовки результатов анализов.
- 1 Скрининг и диспансеризация групп населения (в том числе и беременность, постановка на учет в женской консультации, поступление на работу и оформление медкнижки и так далее).
- 2 Скрининг в группах риска (незащищенные половые контакты с человеком, инфицированным сифилисом, лица после принудительных сексуальных контактов, ВИЧ-инфицированные и так далее).
- 3 Лица, имеющие симптомы заболевания, или лица с подозрением на сифилитическую инфекцию.
- 1 Идентификация Treponema pallidum в тёмном поле (темнопольная микроскопия).
- 2 Заражение подопытных животных (культивирование в лабораторных животных).
- 3 ПЦР (полимеразно-цепная реакция).
- 4 ДНК-зонд или гибридизация нуклеиновых кислот.
- 1
Нетрепонемные тесты:
- Реакция Вассермана (РСК);
- Реакция микропреципитации (МР, РМП) и ее аналоги, которые приведены ниже;
- Тест быстрых плазменных реагинов (RPR, РПР);
- Тест с красным толуидином и сывороткой (TRUST);
- Нетрепонемный тест Лаборатории исследования венерических болезней - VDRL.
- 2
Трепонемные тесты:
- Р-ция иммобилизации Treponema pallidum – РИБТ/РИТ;
- Р-ция иммунофлюоресценции – РИФ, FTA (разведения сывороток РИФ-10, РИФ-200, РИФ-абс);
- Р-ция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРПГА, TPHA);
- Иммуноферментный анализ (ИФА, EIA);
- Иммуноблоттинг.
- 1 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
- 2 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
- 3 Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
- 4 Трудоёмкость выполнения РСК.
- 1 Относительно маленькая стоимость производства тестов;
- 2 Получение быстрого ответа;
- 3 Возможность их применения для скрининга.
- 1 Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
- 2 Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
- 3 Злокачественные новообразования.
- 4 Вирусные и бактериальные инфекции.
- 5 Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
- 6 Беременность.
- 7 Употребление алкоголя.
- 8 Приём жирной пищи.
- 9 Старческий возраст.
- 1 сравнительно высокая чувствительность;
- 2 сравнительно высокая специфичность;
- 3 легкость выполнения;
- 4 малая стоимость реактивов;
- 5 получение быстрого ответа.
- 1 От 0 до 20 - отрицательная проба.
- 2 От 21 до 50 - слабоположительная проба.
- 3 От 50 до 100 - положительная реакция.
- 1 Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
- 2 Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
- 3 Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
- 4 Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
- 5 Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».
Показать всё
1. Классификация методов лабораторной диагностики
Диагностика сифилиса имеет некоторые особенности и отличается от диагностики других бактериальных инфекций. Сложное строение и антигенные свойства бледной трепонемы обусловливают ошибки в интерпретации результатов серологических реакций.
Сдать анализ крови на сифилис предлагают 3 основным группам пациентов:
Все лабораторные методы условно подразделяют на прямые и непрямые.
1.1. Прямые методы
1.2. Непрямые методы
Серологические реакции - это методы лабораторной диагностики, базирующиеся на обнаружении антител (сокращенно АТ) к антигенам бледной трепонемы (сокращенно АГ). Они имеют основное значение для подтверждения диагноза.
Рисунок 1 - Алгоритм серодиагностики сифилиса
1.3. Гистоморфологические методы
Эти методы сводятся к выявлению особенностей гистоморфологии сифилитических проявлений. Внимание уделяется тонкостям строения твёрдого шанкра. Однако, дифференциальная диагностика инфекции с помощью гистологии весьма затруднительна. Гистоморфология используется с другими лабораторными и клиническими тестами.
2. Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле
Этот метод основывается на непосредственном обнаружении бледной трепонемы в исследуемом материале с помощью микроскопа и специальных приспособлений (чаще всего отделяемое эрозий и язв, реже спинномозговая жидкость и другие субстраты).
С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.
Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.
Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.
Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).
На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.
В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.
Рисунок 2 - Темнопольная микроскопия как способ визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале. Источник иллюстрации - CDC
Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.
Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.
3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)
ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.
Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro). Реакция проводится в приборе - амплификаторе, который обеспечивает периодизацию температурных циклов. Происходит охлаждение с последующим нагреванием пробирок с погрешностью в 0,1˚С.
ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними. В стадии отжига температуру реакции снижают для связывания праймера с одноцепочечной матрицей.
Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.
ПЦР-диагностика сифилиса пока носит экспериментальный характер, но оправдана при выявлении врождённой инфекции, в сложных диагностических случаях или при минимальном содержании бледных трепонем в исследуемом материале.
4. ДНК-гибридизация
ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.
При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.
Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.
Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.
ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество - позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.
Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».
Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.
5. Заражение лабораторных животных
Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.
Заражение кроликов проводится в научно-исследовательских центрах и является «золотым стандартом» оценки чувствительности других методов.
Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.
6. Нетрепонемные тесты
Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.
Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.
Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.
Недостатки:
Преимущества:
Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:
Как видно из списка, существует достаточно причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).
7. Реакция связывания комплемента (РСК, Вассермана, RW)
Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.
Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.
При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.
Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.
Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.
8. Реакция микропреципитации
Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).
Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.
Рисунок 2 - Реакция микропреципитации (схема)
Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают. В итоге в сыворотке инфицированного появляются характерные хлопья, разные по степени интенсивности.
Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).
Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).
9. VDRL
Рекомендованный Всемирной организацией здравоохранения метод постановки реакции с антигеном липоидной природы (АГ) по праву считается лучшим среди других стандартных нетрепонемных тестов. Разработан в США, штате Джорджиа в лаборатории венерических болезней (Veneral Diseases Research Laboratories).
Аббревиатура учреждения послужила названием для пробы – VDRL. VDRL - это модификация МР. Сыворотку от больного сифилисом инактивируют и помещают на предметное стекло. Используемый антиген состоит из кардиолипина, холестерина и лецитина в разном процентном соотношении. Ответ регистрируется практически сразу.
Отчётливая флокуляция возникает в присутствии в сыворотке антител. Сыворотка становится реактивна по прошествии 4-х недель после заражения. Для оценки количества антител, сыворотку предварительно разводят в геометрической прогрессии.
Преимущества VDRL:
Недостатком VDRL является относительно высокая частота ложноположительных результатов.
Их причинами являются всё те же перечисленные выше заболевания.
Трепонемные тесты исполняются со специфическими АГ Treponema pallidum. Они необходимы и обязательны для установления окончательного диагноза. Это реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакции непрямой гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА) и др.
После положительного результата нетрепонемного теста (RPR, MP, VDRL) всегда должны выполняться трепонемные (чаще комбинация - РПГА, ИФА, РИФ).
Трепонемные тесты более сложны в исполнении, чем экспресс-тесты, и требуют больших затрат денежных средств.
10. РИФ
Данная реакция (сокращенно РИФ) используется для диагностики сифилиса, в том числе и скрытых форм, и перепроверки положительных и ложноположительных проб.
РИФ основана на свечении меченых антител при соединении с комплексом антиген-антитело под кварцевой лампой. Метод начал применяться в 60-х годах и отличался простотой выполнения и высокой специфичностью (которая немного уступает РИБТ).
Он имеет несколько модификаций: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-abs.
Наиболее чувствительна РИФ в разведении 10 раз, а остальные - более специфичны. РИФ проводится в двух фазах. К АГ добавляют сыворотку крови пациента. Образуется комплекс АГ-АТ, который исследуется в следующей фазе. Далее меченный с помощью флюоохрома комплекс идентифицируют при микроскопии. Если не наблюдается свечение, это указывает на отсутствие специфических АТ в сыворотке крови.
РИФ-200 является наиболее ценным из всех разведений. Метод предназначен для диагностики различных форм сифилиса, особенно скрытого сифилиса и перепроверки положительных проб.
11. РИБТ
Реакция иммобилизации бледных трепонем (сокращено РИБТ, РИТ) одна из сложных серологических проб, требующих значительных усилий и финансовых затрат. РИБТ применяют все реже, но актуальность ее сохраняется в диагностике скрытого сифилиса.
Большое значение она несёт в распознавании ложноположительных результатов у беременных женщин и основывается на иммобилизации бактерий в присутствии иммобилизинов – поздних антител.
Результат оценивается на процентном количестве (%) иммобилизированных трепонем с помощью специальной таблицы:
Ложноположительные результаты также возможны при применении РИБТ. Так, неверный ответ возможен при инфицировании тропическими трепанематозами, а также, при туберкулёзе, циррозе печени, саркоидозе и пациентов старческого возраста.
12. РПГА
Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).
Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.
При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.
Рисунок 3 - Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)
Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.
12.1. Реакция микрогемагглютинации
Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.
13. Иммуноферментный анализ
Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).
Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.
Рисунок 4 - Схема ИФА (иммуноферментного анализа)
Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.
14. Иммуноблоттинг
Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод, модификация простого ИФА. Реакция основана на электрофорезе с разделением антигенов бледных трепонем.
Разделенные иммунодетерминанты переносят на нитроцеллюлозную бумагу и проявляют в ИФА. Далее инкубируют сыворотку и смывают не связавшиеся антитела. Полученный материал обрабатывают иммуноглобулинами (IgМ или IgG), меченными ферментом.
15. Клиническая оценка результатов лабораторной диагностики сифилиса
В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.
Таблица 1 - Расшифровка результатов серологических реакций (анализов крови на сифилис). Для просмотра кликните по таблице
Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:
Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.
Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.
На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.
Непрямые методы диагностики сифилиса.
![](https://i1.wp.com/bestvenerolog.ru/upload/medialibrary/8e5/8e52e34080690cb941e294293688de5a.jpg)
Для диагностики сифилиса применяется множество методов исследования, различающихся по технике проведения и предназначению. Прямые методы направлены на обнаружение возбудителя в исследуемом материале с помощью микроскопии (микроскопия в темном поле и др.) или ПЦР.
Помимо методов прямой детекции бледной трепонемы (T. pallidum), при обследовании на сифилис широкое применение получили непрямые (серологические ) методы исследования, выявляющие антитела к возбудителю сифилиса в сыворотке крови и цереброспинальной жидкости. К непрямым методам диагностики сифилиса относятся серологические реакции ИФА, РПГА, КСР, РИФ и РИФ-абс, РИБТ, ПЦР, экспресс-метод, иммуноблот и другие.
Серологические методы диагностики инфекционных заболеваний.
Серологические критерии диагностики основаны на специфических реакциях "антиген-антитело". Реагируют антигены (компоненты клеточных стенок, жгутиков, капсул, ДНК и токсинов) тех микроорганизмов, которые необходимо определить, с антителами , содержащимися в сыворотках. Между антигенами и соответствующими им антителами происходит связывание, что и положено в основу методов серологической диагностики. Серологические реакции применяются для определения неизвестного антигена (источником которого является бактерия, вирус, токсин и др.) с помощью известного антитела или для определения антитела в сыворотке с помощью известного антигена.
Серологические реакции классифицируют в зависимости от состояния антигена и особенностей среды, в которой взаимодействуют антиген и антитело, а также по способу проведения.
Для проведения серологических реакций испольуют множество лабораторных методов, таких, как агглютинация, преципитация, связывание комплемента, иммунофлуоресценция, иммуноферментный и радиоиммунный анализ и другие. Эти реакции позволяют эффективно проводить предварительную идентификацию микроорганизмов.
Сыворотки, которые необходимы для постановки серологических реакций, получают экспериментальным путем, в частности, их производят институты вакцин и сывороток, и предлагают в составе коммерческих диагностических наборов.
Серологические методы являются важным инструментом в диагностике и лечении инфекционных заболеваний человека и животных, поскольку с их помощью можно не только идентифицировать возбудителя заболевания, но и обнаружить в крови больных и переболевших специфические антитела к соответствующим возбудителям. Серологические методы в настоящее время являются самыми эффективными методами диагностики при невозможности или трудностях выделения возбудителя, и сравнительно редко дают ложноположительные и ложноотрицательные результаты.
Использование серологических методов для диагностики сифилиса
В основе серологических лабораторных методов диагностики сифилиса лежит способность организма давать иммунный ответ на появление возбудителя. С помощью серологических реакций в сыворотке (плазме) крови (или цереброспинальной жидкости) выявляют следы иммунного ответа на заражение, а именно антитела к антигенам бледной трепонемы, или же сами антигены.
Для того, чтобы установить специфический характер имеющихся клинических проявлений (т.е. что они являются следствием именно сифилиса) и, в дальнейшем, контролировать динамику патологического процесса, предложено большое количество серологических методов исследований. Эти же методы также широко применяют для скрининга населения.
В соответствии с действующими национальными руководствами и клиническими методическими рекомендациями, во многих странах мира при обследованиях населения с целью выявления больных сифилисом и при установлении клинического диагноза используются передовые серологические методы. Их применяют как при наличии клинических признаков болезни у пациентов, так и в латентные периоды.
Постановка серологических реакций - один из наиболее надежных методов диагностики сифилиса. Стандартизованные серологические реакции с регламентированной методикой постановки называются серологическими тестами на сифилис. Учитывая то, что почти все серологические реакции на сифилис в определенных условиях могут быть ложноположительными или ложноотрицательными , их следует ставить в комплексе и, при необходимости, в динамике.
Серологические реакции, которые используются для определения антител в сыворотке крови больного, отличаются друг от друга чувствительностью, специфичностью, сложностью постановки и стоимостью. Помимо классических методов, для эффективной серодиагностики сифилиса используются иммунологические тесты и технологии, получившие в 21 веке новый импульс к развитию.
Антитела выявляются различными иммунохимическими (серологическими) методами, среди которых осадочные реакции, иммуноферментный, иммунохемилюминесцентный, иммунохроматографический анализы, линейный иммуноблоттинг, исследование с применением проточной флюорометрии, технология иммуночипов и другие.
Серодиагностика (исследование с помощью серологических методов) применяется для:
- подтверждения клинического диагноза сифилиса,
- постановки диагноза скрытого сифилиса,
- контроля за эффективностью лечения, как один из критериев излеченности больных сифилисом,
- профилактики сифилиса (скрининговое обследование определенных групп населения с целью выявления патологии).
Важнейшие свойства, необходимые серологическим тестам - чувствительность, специфичность, воспроизводимость
Решающим критерием при выборе метода лабораторной диагностики является его эффективность - чувствительность, специфичность и воспроизводимость.
Чувствительность - это доля положительных результатов у больных. Чувствительность метода определяется процентом положительных результатов исследования проб, заведомо содержащих специфические маркеры возбудителя (нпр., антигены возбудителя или антитела к ним).
Специфичность - доля отрицательных результатов теста у здоровых пациентов. Специфичность метода определяется процентом отрицательных результатов исследования проб, заведомо не содержащих специфические маркеры возбудителя. Таким образом, чем выше чувствительность и специфичность, тем надежнее и достовернее метод исследования.
К важным диагностическим критериям также относится воспроизводимость результатов при повторных исследованиях одних и тех же проб. Следует отметить, что, несмотря на значительные достижения в области высоких технологий, не существует методов, обеспечивающих 100% (абсолютную) чувствительность и специфичность во всех исследуемых биопробах.
В настоящее время в России официально регистрируются тест-системы, наборы, ингредиенты, обладающие при постановке реакции менее 95% чувствительностью и специфичностью. Таким образом, всегда существует возможность получения неадекватного результата.
Классификация тестов по типу применяемого антигена. Трепонемные и нетрепонемные тесты на сифилис
В современной венерологии для диагностических целей используется более десятка вариантов серологических реакций на сифилис, которые можно подразделить по разным критериям на различные категории. Классификацию проводят по методологии проведения исследований, области применения, скорости, дешевизне, требованиям к лабораторной оснащенности и т.д.
Трепонемные реакции теоретически более специфичны, однако они также дают ложноположительные результаты. Более того, они не позволяют дифференцировать нелеченный и излеченный сифилис. Результаты трепонемных реакций будут положительными в обоих случаях. Нетрепонемные реакции позволяют различать нелеченную или недавно перенесенную и излеченную инфекцию.
При обследовании рекомендуется проводить и трепонемную, и нетрепонемную реакции. Для установки и подтверждения диагноза "сифилис" требуются положительные результаты при проведении тестов обоих типов - трепонемных и нетрепонемных. Поэтому нетрепонемные тесты применяются в комбинации с трепонемными тестами, и проводятся до начала, в процессе и после окончания лечения в определенные временные интервалы.
1. Нетрепонемные тесты
Наиболее известные из нетрепонемных тестов с визуальной расшифровкой результатов - это
- RW - реакция Вассермана с липидными антигенами (реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном, РСКк)
- реакция Канна (не используется в настоящее время),
- цитохолевая реакция Закс-Витебского (не используется в настоящее время),
- микрореакция преципитации с плазмой или инактивированной сывороткой (МРП или РМП),
- RPR (тест быстрых плазменных реагинов, Rapid Plasma reagin),
- TRUST (тест с толуидиновым красным и непрогретой сывороткой, Toluidin Red Unheated Serum Test).
Среди нетрепонемных тестов имеются 2 теста с микроскопическим считыванием результатов реакции:
1. VDRL - (Venereal Disease Research Laboratory);
2. USR - тест определения активных реагинов плазмы (Unheated Serum Reagins).
Реактивность в нетрепонемных тестах обычно указывает на повреждение тканей и не всегда специфична в отношении сифилиса. Простота выполнения и низкая стоимость позволяет использовать их как отборочные реакции при установлении предварительного диагноза сифилиса.
2. Трепонемные тесты
В трепонемных тестах используются специфические антигены трепонем. Эти тесты обязательны для подтверждения диагноза (РПГА, РИТ, РИФ и ИФА). Они являются более сложными и дорогостоящими, чем тесты 1-й группы, но и более специфичными и чувствительными. Выявление антител в спинно-мозговой жидкости также производится с помощью трепонемных тестов.
Традиционные трепонемные реакции, подтверждающие диагноз сифилиса, требуют дорогого лабораторного оборудования и опытного персонала, поэтому они редко проводятся вне специализированных лабораторий. Однако сейчас их можно заменить простыми и быстрыми трепонемными реакциями, которые возможно проводить на местах и в которых используется цельная кровь. Проведение этих реакций не требует длительного обучения, специальных условий для хранения реактивов и оборудования.
Сравнительная дешевизна, удобство и практичность трепонемных экспресс- реакций привлекают к ним внимание не только как к методам подтверждения диагноза. Эти реакции могут применяться для скрининга сифилиса в рамках оказания первичной медицинской помощи (их можно проводить на местах, в том же лечебно-профилактическом учреждении) или в районах, где лаборатории не доступны. Однако поскольку антитела к T. pallidum определяются на протяжении ряда лет независимо от того, лечился больной или нет, трепонемные экспресс-реакции нельзя использовать для оценки эффективности лечения и дифференциальной диагностики нелеченного и излеченного сифилиса.
Классификация серологических методов диагностики сифилиса по типу определяемых антител
В современной дерматовенерологии для диагностики используются различные серологические реакции на сифилис. Часть методов, которые были актуальны ещё десять лет назад, перестают применяться из-за сложности или недостаточной специфичности. В зависимости от выявляемых антител, методы серологической диагностики сифилиса подразделяются на три группы:
I. Липидные (реагиновые) реакции - определяются антитела к липидным антигенам (реагинам):
1) флокуляционные: микрореакция на стекле с липидными антигенами -экспресс-метод диагностики (микрореакции преципитации - МРП), VDRL, CMF (cardiolipin microflocculation test), RPR и др.;
2) реакция связывания комплемента (РСК) с липидными антигенами: реакция Вассермана (РВ), качественная и количественная методика постановки, термостатная и на холоде (реакция Колмера);
3) осадочные реакции, которые в настоящее время не используются: реакция преципитации Кана, цитохолевая реакция Закса - Витебского и др.;
II. Групповые трепонемные реакции - определяются антитела к групповым трепонемным антигенам (входящим в состав микробной клетки как патогенных, так и сапрофитных трепонем):
1) РСК с протеиновым антигеном Рейтера;
2) реакция иммунофлюоресценции (РИФ);
3) реакция иммунного прилипания (РИП).
III. Видоспецифичные протеиновые трепонемные реакции - определяются антитела к специфическим видовым антигенам Treponema pallidum:
1) реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ);
2) реакция иммунофлюоресценции РИФ-абс и ее варианты (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS, и др.);
3) реакция непрямой гемагглютинации бледных трепонем (РПГА) и её модификация TPPA.
4) иммуноферментный анализ (ИФА);
5) иммуноблотинг.
Практическое использование серологических реакций на сифилис
Различные серологические реакции используются для разных практических целей.
За рубежом при массовых обследованиях населения и при необходимости экстренного выявления сифилиса используются нетрепонемные отборочные реакции (VDRL, RPR и др.). Для постановки диагноза требуется подтверждение в трепонемных тестах РИФ-Абс (FTA-ABS), РПГА или TPPA. В настоящее время, рекомендуется использовать ИФА, как замену VDRL в скрининговых тестах. Это связано с тем, что тест ИФА отличается чувствительностью, специфичностью, возможностью автоматизировать исследования, а также с разработкой диагностических тест-наборов. Кроме того, обосновывается реверсивная схема порядка исследования на сифилис, когда первыми используются трепонемные тесты.
С целью контроля за эффективностью терапии и для оценки активности инфекции рекомендуют VDRL в количественном исполнении. В качестве подтвердающего/дополнительного теста используется тест ИФА на противотрепонемные антитела IgM.
В отечественной практике используют комплекс серологических реакций (КСР), включающий реакцию микропреципитации (РМП) с кардиолипиновым антигеном и РСК с кардиолипиновым и трепонемным антигенами. В последнее время рекомендуется в КСР заменять РСК на ИФА или РПГА. Также используются РИФ (и ее модификации - РИФ-Абс и остальные), РИБТ.
РИБТ применяют в качестве реакции экспертизы в случаях расхождения трепонемных реакций.
Подходы к лабораторной серологической диагностике сифилиса в Российской Федерации
Внедрение в практику унифицированных методов клинических лабораторных исследований в СССР и Российской Федерации позволило ввести более прогрессивные диагностические методы, упорядочить работу клинико-диагностических лабораторий, повысить производительность труда, сократить дублирование лабораторных исследований и стало основой для разработки рациональных форм готовых наборов реактивов.
В 1985 году в СССР, в целях совершенствования диагностики сифилиса, нетрепонемная реакция РСК с неспецифическим (вассермановским) антигеном и осадочные реакции (цитохолевая и Кана) были исключены из диагностического комплекса, как менее чувствительные и не дающие дополнительной информации.
Вместо них, в составе комплекса серологических реакций на сифилис (КСР), было предусмотрено применение реакции связывания комплемента с трепонемным и кардиолипиновым антигенами (РСКт) и микрореакции преципитации с кардиолипиновым антигеном (РМП). Более высокая чувствительность и информативность этого комплекса реакций обеспечивала выявление не только реагинов, но и противотрепонемных антител.
1985 год
1. РМП с кардиолипиновым антигеном с плазмой крови и инактивированной сывороткой крови. Отборочный тест в случае изолированного применения.
2. РСК с трепонемным и кардиолипидовым антигенами; качественная и количественная методики постановки, термостатная и на холоде;
3. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ); пробирочная и меланжерная методики постановки;
4. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) в следующих модификациях: РИФ с абсорбцией (РИФ-абс) с сывороткой крови и капиллярной кровью, РИФ-200, РИФ с цельной спинномозговой жидкостью (РИФ-ц); качественные и количественные методики постановки. Диагностика скрытых и поздних форм сифилиса, распознавание ЛПР (ложно-положительных результатов)
5. Комплекс классических серологических реакций (КСР): РСК (реакции Вассермана) с кардиолипиновым и трепонемным антигенами + РМП. Профилактическое обследование населения на сифилис, диагностика всех форм сифилиса, контроль эффективности лечения, обследование лиц, контактных по сифилису.
В 2001 году Минздравом РФ был утвержден новый нормативный документ, регламентирующий порядок проведения диагностических тестов - приказ Министерства Здравоохранения РФ №87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» .
С целью совершенствования лабораторной диагностики сифилиса, повышения качества работы и предупреждения дальнейшего распространения заболеваемости сифилисом рекомендовано заменить РСК в комплексе серореакций (КСР) при диагностике сифилиса на ИФА и РПГА в качестве отборочных и подтверждающих тестов, т.к. эти тест-системы являются высокочувствительными, специфическими и воспроизводимыми.
Приказ №87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» предусматривает применение для серо- и ликвородиагностики сифилиса в России следующих методов:
1. РМП и зарубежные аналоги (VDRL, RPR и аналогичные микрореакции) в качестве отборочных тестов при обследовании населения на сифилис. Постановка РМП осуществляется с плазмой или инактивированной сывороткой крови.
2. Иммуноферментный анализ (ИФА). Антиген из культуральных или патогенных бледных трепонем. Диагностические реакции, в том числе для ликвородиагностики. В связи с простотой постановки и наличием коммерческих тест-систем могут использоваться как отборочные тесты.
3. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Антиген из культуральных или патогенных бледных трепонем. Отборочные и диагностические реакции.
4. Качественный и количественный варианты РИФ (РИФ-абс, РИФ-ц, РИФ с капиллярной кровью из пальца). Антиген - патогенная бледная трепонема штамма Никольса.
5. Комплекс серологических реакций (КСР) на сифилис, состоящий из реакции связывания комплемента (РСК) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами, и РМП. Возможно заменить реакцию связывания комплемента на ИФА или РПГА также в сочетании с РМП. КСР относится к диагностическим тестам.
6. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), в которой в качестве антигена используют патогенные бледные трепонемы штамма Никольса. РИБТ относятся к диагностическим подтверждающим тестам.
Таким образом, последовательность обследования пациентов на сифилис в учреждениях здравоохранения рекомендуется планировать следующим образом:
1. При первичном обследовании производится постановка отборочной (скрининговой) реакции микропреципитации (РМП) или ее модификации (RPR, TRUST, VDRL) в количественном и качественном вариантах и в случае положительного результата - любого специфического подтверждающего трепонемного теста (РПГА, ИФА, КСР, РИФ, РИТ);
2. После окончания терапии ставится РМП или ее модификация и по снижению титра судят о динамике инфекционного процесса и эффективности терапии. Подтверждением эффективности проведенной терапии считается снижение титра в 4 и более раз в течение 1 года.
Прием по предварительной записи! Суббота, воскресенье.
Реагиновые тесты используются для массового обследования пациентов на сифилис. Их обычно проводят в рамках профилактических осмотров. Такие тесты доступны в каждом лечебном учреждении и проводятся быстро. Ответ обычно готов спустя 30-40 минут.
Положительный результат при проведении реагиновых реакций не является критерием для постановки диагноза. Необходимо дополнительно провести видоспецифические исследования.
Самым распространенным скрининговым методом является реакция Вассермана. При ее проведении используются кардиолипиновый и трепонемный антигены. Если в сыворотке крови нет реагинов, то произойдет гемолиз эритроцитов барана, которые добавляются в качестве индикатора.
При наличии реагинов цельные эритроциты выпадут в осадок, в этом случае реакция считается положительной.
Реагиновые в следующих случаях:
- другие заболевания, возбудители которых по антигенной структуре схожи с бледной спирохетой
- беременность
- онкологические заболевания
- прием салицилатов
- инфаркт миокарда
- технические ошибки при проведении анализа
При положительном результате реагиновой реакции проводятся специфические серологические тесты. Также их назначает, если отрицательный результат вызывает сомнения.
Трепонемные антигены используются в таких анализах, как РИФ, РИТ, ИФА, РПГА, реакция гемадсорбции в твердой фазе. Эти реакции основаны на образовании комплексов антиген-антитело и различаются методикой их определения. Чаще всего используется реакция иммунофлюоресценции.
Препарат обрабатывается люминесцирующей сывороткой, что позволяет определить иммунные комплексы под люминесцентным микроскопом.
Одной из самых чувствительных серологических реакций, позволяющих диагностировать сифилис, является РПГА. Метод обладает высокой точностью. Его часто используется для верификации диагноза при беременности, когда другие анализы могут давать ложноположительный результат.
Особенности серодиагностики
Для проведения серологической диагностики сифилиса в разных его периодах производят забор крови из вены. Анализ рекомендуется проводить натощак, это снижает количество ложноположительных результатов. Пробирка должна быть стерильной. При проведении экспресс тестов в ряде случаев берут кровь из пальца.
При подозрении на для серодиагностики берут спинномозговую жидкость. Для ее анализа используются те же методики, что и при исследовании крови.
Для диагностики сифилиса пройдите полное обследование в нашей клинике.
В России улучшается год от года. Однако ежегодно на тестированиях выявляют тысячи заболевших людей. Обследования на эту болезнь проводят и перед беременностью, и перед любой плановой госпитализацией. Кроме того, ежегодно представители многих профессий проходят диспансеризацию, при которой, кроме всего прочего, нужно сдать анализы на сифилис. И, разумеется, без этого анализа для человека будет закрыта карьера государственного служащего, врача, да и просто вакансии вроде учителей, поваров, воспитателей.
Современная медицина знает множество способов обнаружить бледную трепонему, которая является возбудителем болезни, в крови человека. Эти методы разделяют на несколько больших групп:
- В первой группе исследований - тесты, при которых в биоматериале ищут присутствие трепонемы. Для этого на исследования забирают материал из язв или пораженных болезнью органов.
- Вторая, серологическая группа методов позволяет выявить косвенные следы присутствия трепонемы в организме. Здесь подразумеваются антитела, активной выработкой которых организм реагирует на инфекцию.
Мнение эксперта
Артем Сергеевич Раков, врач-венеролог, стаж более 10 лет
Прямые тесты отлично работают при первых симптомах заболевания, серологические стоит проводить примерно через неделю после появления первой язвы. Иными словами, при подозрении на заражение лучше всего прибегнуть к тестам прямого типа.
Лабораторная диагностика сифилиса
Лабораторное исследование заключается в том, что в пробирке размножают участки ДНК трепонемы в условиях повторяющихся температурных циклов. На каждом этапе количество искусственно воспроизведенных копий возбудителя болезни удваивается. Специалисты называют это амплификацией фрагментов ДНК. Происходит разделение молекул по их весу, что и позволяет выявить трепонему.
ПЦР
Методика ПЦР-исследования позволит отыскать одну молекулу сифилиса даже в том случае, если она одна на тысячи других молекул. Генетический материал для ПЦР-тестирования могут забирать из непосредственно сифилитических язв, ликвора, плацентарной ткани, крови из пальца и даже семенной жидкости. Наиболее часто врачи используют именно тканевую жидкость из язв.
Эффективность ПЦР-исследования достигает 98,6%. При правильно подготовленном исследовании ложноположительные результаты при этом методе практически исключены. Также именно к данной методике врачи прибегают, если предполагают небольшое содержание трепонем в исследуемом материале. Именно этот фактор становится определяющим, если необходимо провести анализ при подозрении на врожденный сифилис.
Темнопольная микроскопия
Темнопольное микроскопическое исследование считается одним из самых дешевых, но вместе с тем эффективных методов выявления наличия бледной трепонемы, а также:
- Для исследования используют специальный солевой раствор, в который помещают препарат. После этого на предметное стекло направляют узкий пучок яркого света. Из-за так называемого феномена Тиндаля возбудители болезни начинают светиться в темном поле раствора.
- Лучшим материалом для подобного типа исследования также являются пробы тканевой жидкости, полученной из генитальных язв, расположенных, соответственно, на гениталиях. Это один из самых быстрых тестов, потому что результаты анализов будут готовы через несколько часов.
Однако стоит учитывать, что темнопольный метод годится для обнаружения еще живых трепонем. Соответственно, проходить такое исследование после начала наружного лечения практически не имеет смысла, так как будет почти невозможно обнаружить живые образцы возбудителя.
RIT-тест
RIT-тест предполагает пересаживание материала от зараженного человека лабораторным кроликам. Чувствительность этих животных к инфекции сифилиса достигает 100%, так что если в биоматериале пациента содержались бледные трепонемы, то они поразят и кролика.
Однако на сегодняшний день этот метод практически не используют в силу дороговизны и временных затрат. При наличии более быстрых анализов врачи предпочитают не ждать, когда симптомы болезни проявятся у животного. Тем не менее этот метод продолжают использовать в исследовательских работах, а также для того, чтобы подтвердить или опровергнуть точность других типов анализов.
Серодиагностика сифилиса
Серологические методы позволяют вычленить не сам возбудитель сифилиса в организме, а антитела, с помощью которых организм старается победить заболевание. Ученые подразделяют серологические методы на две группы, речь о которых пойдет ниже.
К нетрепонемным тестам относятся:
- РМП - реакция микропреципитации с плазмой и инактивированной сывороткой;
- RPR - тест быстрых плазменных реагинов.
Чаще всего специалисты прибегают к нетрепонемным тестам в том случае, если необходимо сделать массовый скрининг на сифилис. Это связано с тем, что такие тесты достаточно дешевы, не требуют специального лабораторного оборудования и отличаются сравнительно высокой точностью.
Также они не менее эффективны при оценке проводимого лечения. С их помощью можно оперативно следить за уровнем антител к сифилису в крови.
К трепонемным тестам относятся:
- ИФА - иммуноферментный анализ;
- РПГА - реакция пассивной гемагглютинации;
- РИФ - реакция иммунофлюоресценции;
- иммуноблоттинг;
- ИХЛ - иммунохемилюминесценция;
- РИБТ (РИТ) - реакция иммобилизации бледных трепонем.
Трепонемные тесты назначают в тех случаях, когда нужно убедиться, что результат нетрепонемного теста не был ложноположительным. К ним же прибегают в тех случаях, если результат скрининга при помощи трепонемного теста разошелся с результатом нетрепонемного.
Кроме того, трепонемные тесты отлично подходят для применения в том случае, если у болезни еще нет видимых проявлений, но присутствуют подозрения врача, основанные на анамнезе и результатах осмотра. К сожалению, нетрепонемные тесты в этот период малоэффективны и зачастую дают ложноотрицательные результаты.
Экспресс-диагностика сифилиса
Этот тип диагностики наиболее часто используется для определенных групп пациентов:
- Подобным тестом стоит воспользоваться каждой беременной женщине, чтобы обезопасить и себя, и будущего ребенка.
- Кроме того, воспользоваться таким методом могут люди, которые проживают в одном помещении с сифилитическими больными, не применяют контрацепцию и часто меняют половых партнеров. Также он подойдет тем, кто не может пройти полноценное обследование в больнице или клинике.
Принцип использования экспресс-теста на сифилис можно сравнить с использованием теста на беременность, однако в нем надо брать несколько капель крови.
Тест лучше всего проводить в первой половине дня натощак. За два дня до предполагаемого тестирования врачи рекомендуют не употреблять спиртное, а примерно за час до процедуры отказаться от сигарет.
Сам анализ занимает немного времени:
- Палец необходимо продезинфицировать спиртовой салфеткой, после чего из пореза выдавить несколько капель крови на тест-устройство.
- Затем добавить туда же идущий в комплекте реагент.
- В среднем нужно подождать 15 минут до появления результата. Специалисты предупреждают, что если результат появился по истечении получаса, то он может быть ложным.
Как вы считаете, какой метод диагностики самый точный?
Серодиагностика Экспресс-диагностика
Стоит учитывать, что если человек заразился совсем недавно, то точность и достоверность подобного тестирования не превышает 80%. Так что приравнивать его к полноценному обследованию у специалиста точно не стоит.
Где можно сдать анализ на сифилис?
Заказать исследование биоматериала на сифилис можно:
- в любой поликлинике;
- частной клинике;
- лаборатории.
Преимущество бюджетных учреждений состоит в том, что там эта услуга бесплатна. Существенный минус заключается во времени ожидания анализа, слабом материально-техническом обеспечении некоторых государственных поликлиник и в том, что если сифилис выявят, то скрыть этот факт будет затруднительно.
Частные клиники и лаборатории согласны работать с пациентами на условиях конфиденциальности. Это подойдет тем, кто не хотел бы, чтобы о его заболевании стало известно. Но следует помнить, что бланк с результатом, где не фигурирует имя пациента, не подлежит приему ни в одной организации.
Разумеется, за анализ в частном учреждении придется заплатить, но и результат можно будет узнать через 2-3 дня. Более того, многие клиники без проблем предлагают экспресс-тестирование и сообщают о результатах анализов уже через пару часов.
Сколько стоит сдать анализ на сифилис?
Ценник на анализ зависит от его вида. Скрининговое исследование обойдется пациенту в 300-400 рублей . Анализ, при котором определяют наличие ДНК в том или ином типе биоматериала, будет стоить в районе 500 рублей.
Разумеется, цены варьируются в зависимости от лабораторий, используемых материалов и итоговой точности самого теста. В этом случае нередко работает правило, согласно которому чем тест дороже, тем он точнее.
Сифилис - коварное заболевание, которое медленно, но верно не только уничтожает внутренние органы, но и затрагивает всю нервную систему человека. К счастью, эта болезнь развивается неспешными темпами, а наука выявила эффективные методы борьбы с ней еще в то время, когда изобрела пенициллин, к которому трепонемы уязвимы до сих пор. Так что главное - вовремя пройти качественное обследование, а после этого обратиться к знающему врачу.
Также вы можете посмотреть видео в этой статье, где врач расскажет вам о РИФ анализе на сифилис.
Сифилис многолик. Инфекция, попадая в организм, оставляет следы не только на кожных покровах и половых органах, но и разрушает нервную систему, опорно-двигательный аппарат, легкие, ухудшает слух и зрение. Несмотря на широкий спектр симптомов и вариантов их сочетаний, медики научились выявлять болезнь и безошибочно указывать стадию ее развития.
Общество желает защититься от заражения бледной трепонемой. А потому предусмотрен ряд экспресс-тестов для ранней диагностики сифилиса или выявления носителей инфекции. Правилом стал забор крови на лабораторную диагностику:
- в случаях беременности;
- перед операцией;
- у доноров перед сдачей крови или органов для трансплантации;
- у медицинских работников, учителей, воспитателей, работников сферы общественного питания и др.;
- у военнослужащих;
- у заключенных.
Лабораторный тест и клиническое обследование на сифилис проведут для:
- пациентов с признаками ЗППП;
- половых партнеров и других членов семьи человека с установленным диагнозом «сифилис»;
- младенцев, родившихся от больной матери;
- всех, у кого установлен диагноз другой болезни, передающейся половым путем;
- проверки эффективности терапевтического метода в ходе лечения;
- всех, у кого скрининг дал положительный результат.
Порядок обнаружения инфекции на приеме у венеролога
Из разговора с пациентом врач выясняет:
- есть ли подтвержденный диагноз «сифилис» у партнера;
- случались ли ранее высыпания на половых органах;
- воспалялись ли лимфатические узлы;
- имел ли место незащищенный секс 3-4 недели назад.
В ходе клинического осмотра кожи, половых органов, ануса, слизистых оболочек специалист выясняет схожесть высыпаний и других поражений кожи с теми, что характерны для сифилиса. Тщательно пальпируются периферические лимфоузлы для оценки степени их увеличения.
В случаях наличия сифилид (твердого шанкра, розеол, папул, гранулем) доктор назначает гистоморфологическое исследование. В лаборатории описывают внешний вид и изучают содержимое образования. По результатам судят о стадии заболевания.
Решающий вклад в диагностику сифилиса вносит лабораторный метод выявления возбудителя или следов иммунного ответа на заражение.
Диагноз устанавливают исходя из совокупности данных, полученных после клинического обследования и лабораторных тестов. В исключительных случаях, когда невозможно провести анализы, лечение назначают на основе осмотра.
Диагностика осложнений
Вторичный и третичный сифилис могут давать осложнения, называемые специфическими висцеритами. В процесс могут включаться все органы и системы, но чаще всего венерологи наблюдают поражения:
- печени;
- нервной системы;
- костей;
- сердца.
Особенно опасен сифилис для беременных женщин. Кроме осложненной беременности не исключено внутриутробное или вертикальное (в родовых путях) заражение плода, мертворождение.
Важно вовремя диагностировать не только инфекцию, но и вторичные заболевания. С этой целью кроме специфических тестов и общих анализов мочи и крови проводятся дополнительные обследования (Таблица).
Лабораторные анализы биологических материалов
Лабораторная диагностика сифилиса стала развиваться с 1905 года, когда был обнаружен возбудитель заболевания – бледная трепонема. До этого содержимым сифилид заражали кроликов, которые стопроцентно чувствительны к инфекции. Уже в 1906 году Вассерманом была разработана первая серологическая реакция на сифилис (RW). В 1949 году медицина предложила более специфичную реакцию иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), но RW не вытеснена из лабораторий до сегодняшнего дня.
На смену первым анализам приходят современные методы диагностики. Они отличаются по технике проведения и предназначению. В списке актуальных тестов:
- темнопольная микроскопия – предусматривает изучение мазка или соскоба для обнаружения трепонемы в исследуемом субстрате (в быту данное исследование иногда называют «мазок на сифилис»);
- молекулярно-биологические методы выявления специфической ДНК (полимеразная цепная реакция, ДНК-зондирование);
- серологическая диагностика сифилиса по сыворотке крови или спинномозговой жидкости.
Темнопольная микроскопия
Из очагов поражения берут пробы для микроскопического исследования на бледную трепонему. Объектами тестирования являются:
- содержимое сифилид;
- тканевая жидкость;
- ликвор;
- амниотическая жидкость;
- ткань пуповины.
Трепонема получила характеристику «бледная» благодаря устойчивости к действию большинства красителей. Живой микроб хорошо виден в темном поле со специальной подсветкой. Лаборант обращает внимание на морфологические признаки бактерий и наблюдает за характером их движения.
Для гистоморфологического исследования пробы окрашивают серебром (по Морозову) или по Романовскому-Гимзе.
Прямые методы микроскопии применяют для диагностики врожденного заболевания или поздних стадий сифилиса. Проверить его правильность можно прямой реакцией иммунофлюоресценции (РИФ-Тр) или полимеразной цепной реакцией (ПЦР). В первом случае выявить возбудителя помогают противотрепонемные антитела и флюоресцирующий краситель, а во втором – молекулы ДНК бледной трепонемы.
Поиск ДНК возбудителя
Даже единственную молекулу ДНК трепонемы можно обнаружить при анализе крови. Успехи в данной области стали возможными с 1991 года, когда был изобретен тест полимеразной цепной реакции (ПЦР). Носитель наследственной информации размножают в специальных температурных условиях и многократно копируют ферментом – ДНК-полимеразой. После, методом электрофореза, выявляются искомые фрагменты цепи.
Это вполне точный и специфичный тест. За рубежом он стал золотым стандартом диагностики сифилиса. В России ПЦР пока скорее исследовательский, чем клинический.
Другим способом выявляют трепонемы при ДНК-зондировании (гибридизации нуклеиновых кислот). В этом случае денатурированную ДНК соединяют со специфическим зондом. Изменение цвета фильтра, на который нанесены пробы, свидетельствует о заражении.
Серологические способы диагностики
Для различных целей диагностики могут использоваться серологические нетрепонемные и трепонемные тесты. В ходе анализа выявляют антитела к бледной трепонеме в крови.
В качестве экспресс-диагностики или скрининга рекомендуют обращаться к следующим нетрепонемным тестам:
- RPR – тесту быстрых плазменных реагинов (Rapid Plasma Reagins);
- RST – тесту отбора реагинов (Reagin Screen Test);
- TRUST – тесту с толуидиновым красным и непрогретой сывороткой (Toluidin Red Unheated Serum Test);
- USR – тесту определения активных реагинов плазмы (Unheated Serum Reagins);
- VDRL – лаборатории изучения венерических заболеваний (Venereal Disease Research Laboratory);
- микрореакции преципитации (МРП) с плазмой или инактивированной сывороткой;
- реакции связывания комплемента (РСК) и ее разновидности с кардиолипиновым антигеном (РСКк).
В основе методики – поиск антител (IgM и IgG) к липидам поврежденных клеток и липопротеинам мембран возбудителя. Положительный ответ названные анализы показывают уже через неделю после появления первых сифилид.
Антитела собственно к трепонеме выявляют методами:
- ELISA – иммуноферментного анализа – ИФА (Enzymelynked immunosorbent assay);
- FTA – реакции иммунофлюоресценции – РИФ (Fluorescent treponemal antibody);
- RW – реакции связывания комплемента (реакция Вассермана);
- RW с трепонемным антигеном – РСКт;
- TPHA – реакции пассивной гемагглютинации – РПГА (Treponema pallidum haemagglutination assay);
- TPI – реакции иммобилизации бледных трепонем – РИБТ или РИТ (Treponema pallidum immobilization test);
- Western Blot – иммуноблотинга.
Венерологи следуют определенному порядку проведения серологических тестов. В качестве экспресс-диагностики проводят один из нетрепонемных анализов. Учитывается низкая чувствительность в ранней и поздней стадиях инфицирования. Поэтому как отрицательные, так и положительные ответы при определенной клинической картине должны быть перепроверены трепонемными методами.
В разных жизненных ситуациях могут наблюдаться сочетания положительных и отрицательных ответов. Расшифровать их поможет таблица.
Окончательные выводы делает венеролог на основании комплекса данных: клинической картины, гистологических и лабораторных исследований.
Источники:
- Аковбян В.А., Прохоренков В.И., Новиков А.И., Гузей Т.Н. // Сифилис: иллюстр. рук-во (ред. В.И. Прохоренков). – М.: Медкнига, 2002. – С. 194-201.
- Дмитриев Г.А., Фриго Н.В. // Сифилис. Дифференциальный клинико-лабораторный диагноз. – М.: Мед. книга, 2004. – С. 26-45.
- Лосева О.К., Ловенецкий А.Н. Эпидемиология, клиника, диагностика и лечение сифилиса: рук-во для врачей. – М., 2000.
- Панкратов В.Г., Панкратов О.В., Навроцкий А.Л. и др. // Рецепт (приложение: Междунар. науч.-практ. конф. «Современные подходы к диагностике, лечению и профилактике инфекций, передаваемых половым путем», Гродно, 2005). – 2005. – С. 165-169.
- Панкратов В.Г., Панкратов О.В. // Современные возможности лабораторной диагностики сифилиса и трактовка результатов исследования. – Минск, Белорусская медицинская академия последипломного образования, 2006.
- Панкратов В.Г., Панкратов О.В., Крукович А.А. и др. // Здравоохранение. – 2006. – № 6. – С. 35-39.
- Родионов А.Н. // Сифилис: рук-во для врачей. – СПб.: Питер, 1997. – С. 226-245.
- Хурадо Р.Л. // ЗППП. – 1997. – № 3. – С. 3-10.
- Шмидт Б.Л. // Первый Российский конгресс дерматовенерологов: тез. науч. работ. – СПб., 2003.– Т. II. – С. 40-41.
- Romanowski B., Sutherland R., Flick G.H. et al. // Ann. Med. –1991. – V. 114. – P. 1005-1009.