Cerebrospinālā šķidruma pārbaude sifilisa gadījumā. Pandey reakcija: kāda veida pētījums tas ir un kāpēc tas tiek veikts? Metode karalisko dinastiju datēšanai un metode fantomu dinastiju dublikātu noteikšanai
Cerebrospinālais šķidrums (sinonīms cerebrospinālais šķidrums) ir šķidra vide nervu sistēma, kas cirkulē smadzeņu subarahnoidālajā telpā un smadzeņu kambaros. Galvenokārt smadzeņu dzīslenes pinumi piedalās cerebrospinālā šķidruma veidošanā (sk.). Cerebrospinālais šķidrums tiek ražots un uzsūcas nepārtraukti, un tā atjaunošanās notiek vienas līdz vairāku dienu laikā. Lielākā daļa Cerebrospinālais šķidrums cirkulē sānu, trešajā un ceturtajā smadzeņu kambarī, mazāka daļa - subarahnoidālajā telpā. Normālu cerebrospinālā šķidruma cirkulāciju nodrošina galvas, rumpja, ekstremitāšu kustības, elpošanas kustības, smadzeņu pulsācija.
Cerebrospinālais šķidrums no sānu kambariem caur starpkambaru (Monro) atverēm nonāk trešajā kambarī, kas sazinās ar ceturto kambari caur smadzeņu (Sylvian) akveduktu. No pēdējās caur vidējo atveri (Magendie) un sānu atveri (Lushka) cerebrospinālais šķidrums nonāk aizmugurējā cisternā, no kurienes tas izplatās pa pamatnes cisternām un smadzeņu izliekto virsmu, kā arī subarahnoīdu. telpa muguras smadzenes.
Parasti cerebrospinālais šķidrums ir bezkrāsains un caurspīdīgs. Tā daudzums svārstās no 15 līdz 20 ml pieaugušajiem un 100-150 ml pieaugušajiem. Cerebrospinālā šķidruma īpatnējais svars ir 1006-1012, reakcija ir nedaudz sārmaina (pH ir 7,4-7,6). Cerebrospinālais šķidrums sastāv no ūdens daļas un sausa atlikuma, kas ietver organiskās un neorganiskās vielas. Olbaltumvielu daudzums cerebrospinālajā šķidrumā svārstās no 12 līdz 43 mg%. Olbaltumvielas sastāv no albumīniem un globulīniem. Kopējais slāpeklis 16-22 mg%, atlikušais slāpeklis 12-28 mg%; bērniem 17-26 mg%. Cukurs ir 40-70 mg%. Hlorīdi 680-720 mg%. Tiek atklāts neliels daudzums lipīdu, aminoskābju, mikroelementu un dažu citu vielu. Cerebrospinālais šķidrums satur nelielu daudzumu šūnu (limfocīti, plazmas šūnas, monocīti). Pieaugušajiem 1 mm 3 cerebrospinālā šķidruma ir 1-5 šūnas; jaundzimušajiem - 20-25 šūnas uz 1 mm 3, līdz vienam gadam šūnu skaits samazinās līdz 12-15 šūnām uz 1 mm 3.
Normāls cerebrospinālā šķidruma spiediens cilvēkam, kad (sk.) atrodas horizontālā stāvoklī, ir 100-150 mm ūdens. Art. un palielinās vertikālā stāvoklī līdz 200-250 mm ūdens. Art. Spiediens, zem kura galvaskausa dobumā atrodas cerebrospinālais šķidrums un smadzenes, nosaka intrakraniālo spiedienu. Intrakraniālā spiediena palielināšanās, kas rodas cerebrospinālā šķidruma ražošanas palielināšanās vai tā aizplūšanas pārkāpuma rezultātā, izraisa hipertensijas sindromu, kura galvenie simptomi ir galvassāpes, reibonis, sastrēgumi redzes nervu papiloni un izmaiņas. kraniogrammā.
Dažādos patoloģiskos procesos (audzēji, iekaisuma perēkļi) var novērot subarahnoidālās telpas caurlaidības traucējumus. Lai pētītu subarahnoidālās telpas caurlaidību, tiek izmantoti Queckenstedt un Stukey liquorodynamic testi. Ar Queckenstedt testu punkcijas laikā vairākas sekundes tiek piespiests jūga vēnām, ievērojami palielinās cerebrospinālā šķidruma spiediens - tests ir negatīvs. Ja virs punkcijas vietas ir aizsprostojums, spiediens nepalielinās - tests ir pozitīvs. Stukey tests: punkcijas laikā vairākas sekundes tiek saspiestas vēdera vēnas - cerebrospinālā šķidruma spiediens palielinās aptuveni 2 reizes - tests ir negatīvs. Ja krūšu kurvja lejasdaļā ir subarahnoidālās telpas blokāde, jostasvietas muguras smadzenes, spiediens nepalielinās - tests ir pozitīvs.
Intrakraniālais spiediens palielinās ar smadzeņu un muguras smadzeņu un to membrānu iekaisuma slimībām, kā arī ar telpu aizņemošiem procesiem. Plkst dažādas slimības nervu sistēma, mainās cerebrospinālā šķidruma sastāvs un īpašības. Dažos gadījumos var būt dominējošs šūnu vai olbaltumvielu skaita pieaugums. Šūnu-olbaltumvielu disociācija - ievērojams šūnu skaita pieaugums ar nemainīgu vai mēreni palielinātu proteīna saturu - notiek strutainā un serozā meningīta gadījumā; strutojošu meningītu raksturo neitrofīls pleocitoze, savukārt serozais meningīts ir limfocītu vai jaukts ar limfocītu pārsvaru. Olbaltumvielu šūnu disociācija - olbaltumvielu satura palielināšanās ar normālu vai nedaudz palielinātu šūnu skaitu - notiek smadzeņu audzēju, abscesu un cistiskā arahnoidīta gadījumā.
Pārbaudot cerebrospinālo šķidrumu, lietojam kvalitatīvas reakcijas globulīniem, kurus izmanto, lai spriestu par paaugstinātu proteīna vielu saturu: Nonne-Apelt reakcija un Pandi reakcija. Nonne-Apelt reakcija tiek veikta šādi: 0,5 ml cerebrospinālā šķidruma sajauc ar 0,5 ml daļēji piesātināta amonija sulfāta šķīduma, un šķidruma caurspīdīgums mainās atkarībā no globulīnu satura cerebrospinālajā šķidrumā. Veicot Pandey reakciju, uz pulksteņa stikla uzlej 10% karbolskābes šķīdumu un no tā pilina vienu vai vairākus pilienus cerebrospinālā šķidruma. Tā rezultātā šķidrums kļūst duļķains. Atkarībā no duļķainības šīs reakcijas tiek novērtētas kā vāji pozitīvas (+), pozitīvas (+ +), skaidri pozitīvas (+ + +) un izteikti pozitīvas (+ + + +). Dažiem infekcijas slimības Antivielas cerebrospinālajā šķidrumā nosaka, izmantojot specifiskas reakcijas, piemēram, Vasermana un Kāna reakcijas (pret sifilisu), (pret brucelozi) utt. svarīgs veic cerebrospinālā šķidruma bakterioloģisko un virusoloģisko pētījumu, lai identificētu dažādus mikrobus, tuberkulozes baciļus, vīrusus.
Diagnostiskie laboratoriskie izmeklējumi psihiatrijā ir vērsti uz pacienta somatiskā stāvokļa novērtēšanu, novērošanu ārstēšanas laikā, kā arī psihiskus traucējumus izraisošu somatisku slimību identificēšanu. Lielākā daļa laboratorijas metožu, ko izmanto psihiatrijā, neatšķiras no vispārējās somatiskās medicīnas metodēm. Tomēr ir vairākas specifiskas metodes, ar kurām var ļoti precīzi noteikt etioloģisko diagnozi “in vitro”. Tie ietver koloidālās reakcijas, ko izmanto sifilisa diagnosticēšanai, aminoskābju metabolisma traucējumu identificēšanu garīgās atpalicības gadījumā, narkotisko vielu satura noteikšanu bioloģiskajos barotnēs, kā arī psihotropo zāļu līmeņa noteikšanu asinīs, lai kontrolētu ārstēšanu.
I. Psihoaktīvo vielu satura noteikšana urīnā.
To izmanto, lai konstatētu psihoaktīvo vielu vienreizējas lietošanas faktu, un ar atkārtotu konstatāciju - lai konstatētu to ļaunprātīgu izmantošanu un atkarības esamību pacientam. Periods, kurā šīs vielas var konstatēt pēc pēdējās devas, svārstās no vairākām stundām līdz mēnesim. Aptuvenais laiks, kurā zāles var noteikt urīnā, ir norādīts tabulā:
Vielas |
Laiks |
Alkohols | |
Barbiturāti |
24 h (nepagarināta izlaišana) 3 nedēļas (ilgstošas iedarbības) |
Benzodiazepīni | |
6-8 stundas (metabolīti - 2-4 dienas) |
|
Marihuāna |
3 dienas – 4 nedēļas (atkarībā no lietošanas biežuma) |
Metakvalons | |
Fenilciklidīns | |
Propoksifēns | |
II. Cerebrospinālā šķidruma pamata reakcijas.
Pandijas reakcija
Noteikšanas metode ir balstīta uz CSF duļķainības pakāpes noteikšanu, kad to pievieno 15% karbolskābes šķīdumam. Uz stikla priekšmetstikliņa tiek uzklāti daži pilieni Pandi reaģenta un 1-2 pilieni cerebrospinālā šķidruma. Tos sajaucot, parādās dažāda smaguma duļķainība (atkarībā no olbaltumvielu daudzuma CSŠ). Rezultāts tiek noteikts uz tumša fona pēc 2 minūtēm. Duļķainības pakāpi norāda ar plusiem (+, ++, +++, ++++) vai (pēc SI sistēmas) cipariem (1,2,3).
Diagnostikas vērtība. Sniedz vispārēju priekšstatu par olbaltumvielu saturu cerebrospinālajā šķidrumā, neņemot vērā īpašu globulīna testu.
Nonne-Appell reakcija.
Noteikšanas metode pamatā ir globulīnu izgulsnēšana ar piesātinātu amonija sulfāta šķīdumu. Vienāds daudzums CSF tiek slāņots mēģenē, kurā ir 0,5-1,0 ml reaģenta. Pēc 2 minūtēm pie šķīduma robežas parādās balts gredzens. Pēc tam mēģeni sakrata un nosaka duļķainības pakāpi, izsakot to kā plusus. Duļķainība parādās jau pie olbaltumvielu satura 0,033 g/l.
Diagnostikas vērtība. Sniedz relatīvu priekšstatu par normālu vai patoloģisku globulīnu saturu, kuru skaits īpaši palielinās deģeneratīvu un hronisku iekaisuma slimību gadījumā.
Langes reakcija(ar koloidālo zeltu)
Noteikšanas metode. Ja ļoti izkliedētam koloidālam zelta hlorīda šķīdumam pievieno patoloģisku cerebrospinālo šķidrumu, notiek koagulācija, daļiņu nogulsnēšanās un šķīduma krāsas izmaiņas. Katrā no desmit mēģenēm, kas satur CSF dažādos atšķaidījumos (1:10, 1:20, 1:40 utt.), pievieno 2,5 ml koloidālā šķīduma. Rezultāts tiek novērots pēc dienas. Ar normālu cerebrospinālo šķidrumu visās mēģenēs šķīduma krāsa paliek sarkana (3.-5. mēģenēs iespējama tikai neliela tā intensitātes samazināšanās). Patoloģiskos apstākļos mainās krāsa, krāsas maiņa tiek novērtēta ar skaitļiem 0 - sarkans, 1 - sarkanvioleti, 2 - violets, 3 - zili violets, 4 - zils, 5 - zils, 6 - balts.
Diagnostikas vērtība. Ir normālas, deģeneratīvas (krāsas izmaiņas rindas kreisajā pusē - novērotas ar sifilisu, audzējiem, multiplo sklerozi), iekaisīgas (krāsas izmaiņas rindas labajā pusē - novērotas ar meningītu) un jaukta veida izliekumi (krāsu izmaiņas). rindas kreisajā un vidējā daļā novēro ar jauktiem meningo-parenhīmas bojājumiem).
Jostas CSF galvenie fizikālie un ķīmiskie rādītāji: bezkrāsains, caurspīdīgs, pH = 7,4-7,6, kopējais proteīns – 0,22-0,33 g/l, albumīni – 46,6-52,8‰, globulīni – 53,4-47,2‰, fibrinogēns – 0,0019-0,0030 g/l, urea. l, glikoze – 2,5-4,44 mmol/l, holesterīns – 0,002-0,011 mmol/l, kopējais slāpeklis – 11,4-15,7 mmol/l, atlikušais slāpeklis – 8,6-13,6 mmol/l.
III. Psihotropo zāļu satura noteikšana plazmā. Tam ir praktiska nozīme gadījumos, kad pastāv tuvu lineāra sakarība starp zāļu saturu plazmā un terapeitisko efektu un ja ir zināms "terapeitiskais logs", tas ir, koncentrācijas diapazons, kurā zālēm ir vislielākā terapeitiskā iedarbība. efekts. Lieto litijam un dažiem tricikliskajiem antidepresantiem garastāvokļa traucējumu ārstēšanā.
Litija satura noteikšana: asinis ņem 12 stundas pēc pēdējās zāļu devas iekšķīgi (parasti no rīta pēc vakara devas); noteikšanu biežums ārstēšanas sākumā – 1-2 reizes nedēļā, pēc devas iestatīšanas – 1 reizi mēnesī. Bipolāru afektīvu traucējumu uzturošai terapijai nepieciešama koncentrācija 0,6-1,0 mEq/L, mānijas stāvokļu atvieglošanai – 1,0-1,5 mEq/L.
Tricikliskie antidepresanti: "ārstnieciskais logs" imipramīnam (melipramīnam) - 200-250 ng/ml, triptizolam (amitriptilīnam) - 120-250, nortriptilīnam - 50-150, desipramīnam (petililam) - 125-250 ng/ml.
Hemorāģiskā bilirubinarhija ( ksantohromija) izraisa asiņu iekļūšana cerebrospinālā šķidruma telpās, kuru sadalīšanās rezultātā cerebrospinālais šķidrums iekrāsojas rozā, pēc tam oranžā, dzeltenīgā, dzeltenā, dziļi dzeltenā krāsā. Turklāt dzēriens var būt kafijas dzeltens, brūns un brūns. Šie cerebrospinālā šķidruma krāsu varianti rodas hemoglobīna sadalīšanās produktu dēļ eritrocītos un dažādās formās hemoglobīns. Ksantohroma krāsa parādās ar dzelti; smadzeņu audzēji, kas bagāti ar asinsvadiem un atrodas tuvu šķidruma telpai; cistas; subarahnoidāla lielu penicilīna devu ievadīšana; Jaundzimušajiem šī krāsošana ir fizioloģiska.
sarkanā krāsa(eritrohromija) nodrošina nemainītas asinis cerebrospinālajā šķidrumā, kas var parādīties traumas vai asiņošanas rezultātā.
Tumšs-ķirsis vai tumšs-brūna krāsa iespējams ar hematomām un cerebrospinālā šķidruma noplūdi no cistām.
CSF duļķainība ir atkarīgs no ievērojama šūnu elementu (eritrocītu, leikocītu, audu šūnu elementu), baktēriju, sēnīšu skaita palielināšanās un olbaltumvielu satura palielināšanās. Forma apraksta šķidrumu: pilnīgi caurspīdīgs, opalescējošs, nedaudz duļķains, duļķains, strauji duļķains šķidrums.
Fibrīna plēve Parasti cerebrospinālais šķidrums praktiski nesatur fibrinogēnu. Fibrinogēna parādīšanos cerebrospinālajā šķidrumā izraisa centrālās nervu sistēmas slimības, kas izraisa BBB traucējumus. Fibrīnas plēves veidošanos in vitro izraisa fibrinogēna pāreja uz fibrīnu. Fibrinālā plēve veidojas cerebrospinālajā šķidrumā ar ļoti augstu fibrinogēna saturu, un uz mēģenes sieniņām ir smalkas plēves izskats, maisiņš, kas satur cerebrospinālo šķidrumu ar šūnu elementiem.
Palielināts olbaltumvielu daudzums dzērienā var būt ar tuberkulozu, strutojošu, serozu meningītu, hemodinamikas traucējumiem, pēc smadzeņu operācijām, ar smadzeņu audzēju, poliomielītu, smadzeņu traumu ar subarahnoidālu asiņošanu, nefrītu ar urēmiju. Akūtā iekaisuma gadījumā palielinās α-globulīni hroniska iekaisuma gadījumā, palielinās β- un γ-globulīni. Olbaltumvielu palielināšanās cerebrospinālajā šķidrumā dažādos patoloģiskos procesos ir atkarīga no hemodinamikas traucējumiem smadzeņu traukos, kas izraisa to sienu caurlaidības palielināšanos un asins plazmas olbaltumvielu molekulu iekļūšanu cerebrospinālajā šķidrumā. Olbaltumvielas nosaka, reaģējot ar 3% sulfosalicilskābi.
Pandi un Nonne−Apelt pozitīvās reakcijas norāda uz paaugstinātu globulīna frakcijas saturu un pavada asinsizplūdumus smadzenēs, smadzeņu audzējus, dažādas izcelsmes meningītu, progresējošu paralīzi, tabes dorsalis, multiplo sklerozi. Piejaukums asins cerebrospinālajam šķidrumam vienmēr rada pozitīvas globulīna reakcijas.
Glikozes koncentrācija cerebrospinālajā šķidrumā dažādām slimībām ir atspoguļots tabulā. 3-13. Hipoglikoarhijas cēlonis ir pastiprināta glikolīze, traucēta transportēšana caur hematoencefālisko barjeru un palielināta glikozes izmantošana šūnās, īpaši leikocīti.
Pleocitoze- šūnu skaita palielināšanās cerebrospinālajā šķidrumā. Neliela pleocitoze iespējama ar sifilisu, specifisku meningītu, arahnoidītu, encefalītu, multiplo sklerozi, epilepsiju, audzējiem. Akūtā strutojošā meningīta un abscesa gadījumā tiek novērota masīva pleocitoze. Cerebrospinālā šķidruma pētījuma rezultāti plkst dažādi veidi meningīts ir norādīts tabulā. 3-15.
Limfocītu pleocitoze tiek novērota pēcoperācijas periodā neiroķirurģisku operāciju laikā, hronisks iekaisums smadzeņu apvalks (tuberkulozais meningīts), vīrusu, sifilīts, sēnīšu meningoencefalīts. Mērens pleocitoze ar limfocītu pārsvaru ir iespējama, ja patoloģiskais process ir lokalizēts dziļi smadzeņu audos.
Neizmainīti neitrofīli tiek novēroti, ja smadzeņu operācijas vai akūta iekaisuma laikā cerebrospinālajā šķidrumā nonāk svaigas asinis; izmainīti neitrofīli - kad iekaisuma process samazinās. Neizmainītu un izmainītu neitrofilu kombinācija norāda uz iekaisuma saasināšanos. Pēkšņa lielas neitrofīlas pleocitozes parādīšanās ir iespējama, kad abscess iekļūst cerebrospinālā šķidruma telpās. Poliomielīta gadījumā slimības sākumā dominē neitrofīli, kam seko limfocīti.
Eozinofīli tiek atklāti subarahnoidālo asiņošanu, toksisku, reaktīvu, tuberkulozu, sifilītu, epidēmisku meningītu un smadzeņu audzējiem.
Plazmas šūnas tiek konstatētas encefalīta, tuberkulozes meningīta un gausas brūču dzīšanas gadījumā pēc operācijas.
Makrofāgi tiek atklāti ar normālu citozi pēc asiņošanas un iekaisuma procesa laikā. Lielu skaitu makrofāgu cerebrospinālajā šķidrumā var konstatēt sanitārijas laikā pēcoperācijas periodā. To trūkums pleocitozē ir slikta prognostiska zīme. Makrofāgi ar tauku pilieniem citoplazmā (granulu lodītes) atrodas šķidrumā no smadzeņu cistām un dažos audzējos.
Epitēlija šūnas tiek identificētas membrānu jaunveidojumu laikā, dažreiz iekaisuma procesa laikā.
Ļaundabīgo audzēju šūnas var atrast smadzeņu kambara cerebrospinālajā šķidrumā vēža un melanomas metastāžu laikā smadzeņu garozā, subkortikālajos reģionos un smadzenītēs; blastu šūnas - neiroleikēmijas gadījumā.
Sarkanās asins šūnas parādās cerebrospinālajā šķidrumā intrakraniālu asiņošanu laikā (un tas nav tik daudz absolūtais daudzums, cik liels pieaugums atkārtotu pētījumu laikā).
… Paralēli kopējās saslimstības ar sifilisu pieaugumam pieaug arī neirosifilisa gadījumu īpatsvars.Saskaņā ar instrukcijām sifilisa ārstēšanai un profilaksei pirms ārstēšanas jāveic cerebrospinālā šķidruma izpēte pacientiem ar agrīnu un vēlu latentu sifilisu nervu sistēmas klīnisko bojājumu klātbūtnē, kā arī latentās un vēlīnās formās. no neirosifilisa.
Likoroloģiskās pārbaudes tiek veiktas pēc dereģistrācijas:
(1 ) pacienti, kuriem tika uzsākta agrīna un vēlīna neirosifilisa ārstēšana;
(2 ) personām, kurām klīniskās un seroloģiskās kontroles laikā attīstījās kāda specifiska nervu sistēmas bojājuma klīniska izpausme (akūts sifilīts meningīts, meningovaskulārais sifiliss, sifilīts meningomielīts, tabes dorsalis, sifilīta gumija, sifilīts neirīts un polineirīts, redzes nervu sifilīts bojājums). , sifilīts dzirdes nervu bojājumi, sifilīts meningomielīts, progresējoša paralīze);
(3 ) personām ar seroloģisko rezistenci, kas saglabājas klīniskās un seroloģiskās novērošanas perioda beigās.
Cerebrospinālais šķidrums pētniecībai tiek iegūts ar lumbālpunkciju starp III un IV vai IV un V jostas skriemeļiem, izmantojot garas tievas punkcijas adatas (diametrs no 0,4 līdz 0,8 mm un garums 10-12 cm). Divās sterilās mēģenēs (ne vairāk kā 8-10 ml) savāc 3-4 ml šķidruma. Jānodrošina, lai šķidrums izplūstu un kanulās nokristu pilienu veidā (20-40 pilieni minūtē). Ja šķidrums izplūst strūklā pēc mandrīna izņemšanas no adatas, mandrīns nekavējoties jāievieto atpakaļ seklā dziļumā, lai pielāgotu šķidruma plūsmas ātrumu.
Ja pirmie cerebrospinālā šķidruma pilieni ir notraipīti ar asinīm, jāmaina adatas novietojums (iespiediet to dziļāk vai nedaudz izvelciet). Pēc tam dzidru šķidrumu savāc citā mēģenē (netiek pārbaudīta cerebrospinālā šķidruma daļa, kas sajaukta ar asinīm).
Pēc punkcijas punkcijas vietu apstrādā ar 3-5% joda tinktūru un uzliek sterilu pārsēju. Lai novērstu komplikācijas, pacients tiek novietots uz gultas ar vēderu uz leju (gultas pēdas gals ir pacelts par 20-30 cm). Pēc 3-4 stundām viņam atļauts apgriezties uz sāniem. Gultas režīms novērota 24-48 stundas. Pacientam ieteicams dzert daudz šķidruma un badoties 6-8 stundas pēc punkcijas.
Tiek nosūtīta viena daļa cerebrospinālā šķidruma (3-4 ml). uz klīniski bioķīmisko laboratoriju, lai pētītu citozi, olbaltumvielu saturu un veiktu globulīna (Pandy, Nonne-Appelt, Weichbrodt vai Takata-Ara) un koloidālās (Lange vai parafīna) reakcijas.
Nonne-Apelt reakcija. Izmantojot piesātinātu amonija sulfāta šķīdumu, reaģenta saskarnē ar cerebrospinālo šķidrumu tiek izveidots proteīna gredzens. Pēc kratīšanas un līdz ar to sajaukšanas tiek iegūti dažādas intensitātes šķidrumi, opalescence vai duļķainība. Nonne-Apelt reakcija tiek novērtēta, izmantojot četru punktu sistēmu: vāji pozitīva (+) - opalescence ir vāji pamanāma, vidēji pozitīva (++) - neliela duļķainība, pozitīva (+++) - izteikta duļķainība un strauji pozitīva (++). ++) - intensīva duļķainība . Ross-Džonss nedaudz mainīja šo reakciju. Viņš ierosināja nejaukt cerebrospinālo šķidrumu ar piesātinātu amonija sulfāta šķīdumu, bet uzmanīgi ielej to no pipetes pa pilienam uz koncentrētāku reaģentu. Turklāt cerebrospinālais šķidrums tiek sagatavots dažādās atšķaidīšanas pakāpēs. Pēc 3 minūtēm nosaka šķidrumu un amonija sulfāta šķīduma saskarnē izveidotā gredzena duļķainības pakāpi. Opalescences gredzens veidojas, ja olbaltumvielu saturs cerebrospinālajā šķidrumā ir 3 g/l koncentrācijā.
Pandijas reakcija izgulsnē ne tikai globulīnus, bet arī visus cerebrospinālā šķidruma proteīnus. Tas sastāv no 10-15 pilienu 10% karbolskābes šķīduma uzlikšanas uz pulksteņa stikla, kas tiek novietots uz tumša fona, pēc tam vienu pilienu cerebrospinālā šķidruma. Reakcija ir ļoti jutīga, un to nosaka duļķainības intensitāte, kas veidojas šķidruma un reaģenta saskares vietā pēc 3 minūtēm.
Vainbrohta reakcija To ražo tā, ka 7 daļām cerebrospinālā šķidruma pievieno 3 daļas 0,1% sudraba nitrāta šķīduma un pēc tam sakrata. Tajā pašā laikā nāk dažādas pakāpes duļķainība, pēc kuras tiek spriests par proteīna vielu (ne tikai globulīnu) saturu.
Takata-Ara reakcija. Koloidāla reakcija. Ja sublimāta un fuksīna šķīdumus pievieno sārmainam šķidrumam, parasti tiek novērots purpursarkans maisījums. Kad šķidrums notīra un parādās nogulsnes, reakcija tiek apzīmēta kā metasifiliska (progresējoša paralīze, ja tā ir iekrāsota sarkanā krāsā, to sauc par meningītu).
Langes reakcija balstās uz patoloģiski izmainīta cerebrospināla šķidruma spēju, ja to sajauc ar koloidāliem šķīdumiem, mainīt šķīduma dispersiju un līdz ar to arī tā krāsu; ar normālu cerebrospinālo šķidrumu šķīduma purpursarkanā krāsa nemainās. Patoloģijā ir vairāki krāsu maiņas līknes veidi. Pirmais veids ir paralītisks: pakāpeniski pieaugot cerebrospinālā šķidruma sadalīšanās pakāpei mēģenēs, krāsas maiņa notiek tikai pirmajās 5 mēģenēs ar diezgan strauju atgriešanos normālā stāvoklī. Šis reakcijas gaita ir raksturīga progresējošai paralīzei. Citām neirosifilisa formām raksturīgāks ir sifilīts zobs - mērenas krāsas izmaiņas 2.-5.mēģenē. Otrs līknes veids ir meningīts (akūts meningīts): krāsas maiņa tiek novērota no 2-3 caurules, maksimumu sasniedz 6. un 7. caurulē, pēc kuras tā pēkšņi atgriežas normālā stāvoklī. Citās centrālās nervu sistēmas slimībās Lange reakcija ir diezgan tipiska un nevar kalpot kā diagnostikas palīglīdzeklis.
Tiek nosūtīta otrā cerebrospinālā šķidruma daļa (3-4 ml). uz seroloģisko laboratoriju, lai veiktu Vasermana reakciju ar kardiolipīna un treponēmas antigēniem, RIF un RIBT.
Vasermana reakcija(komplementa fiksācijas reakcija, CFR) ar treponēmas un kardiolipīna antigēniem tiek izmantoti, lai apstiprinātu sifilisa diagnozi aktīvo slimības izpausmju klātbūtnē, izmeklētu personas, kuras bijušas tiešā kontaktā ar sifilisa slimnieku, identificētu latento (latento). ) sifilisu un terapijas efektivitāti. Pārbaudot pacientus psihiatriskajās un neiroloģiskās slimnīcās. Donori un grūtnieces, tostarp personas, kas nosūtītas uz abortu.
Asinis pētniecībai ņem 5-7 ml daudzumā no elkoņa kaula vēnas ar sterilu adatu. Zīdaiņiem asinis ņem no temporālās vēnas vai no iegriezumiem papēžā. Asins savākšana tiek veikta stingri tukšā dūšā. Un atstājiet to tīrās, sausās mēģenēs 2-3 stundas istabas temperatūrā koagulācijai. DSR un specifisko reakciju pārbaude tiek veikta dermatoveneroloģisko iestāžu seroloģiskajās laboratorijās.
RSC princips ir tāds, ka reaginiem, kas atrodami sifilisa slimnieku asins serumā, piemīt īpašība kombinēties ar dažādiem antigēniem. Iegūtie kompleksi šķiro reakcijā ievadīto komplementu. Lai norādītu reagīna-antigēna-komplementa kompleksu, tiek izmantota hemolītiskā sistēma (aitas eritrocītu maisījums ar hemolītisko serumu). Kompleksa klātbūtnē sarkanās asins šūnas izgulsnējas. Kas ir pamanāms ar neapbruņotu aci. Hemolīzes smagumu ārsts norāda ar šādiem taustiņiem: asi pozitīvs 4+, pozitīvs 3+, vāji pozitīvs 2+ vai 1+ un negatīvs. Papildus šo reakciju kvalitatīvajam novērtējumam tiek veikts arī kvantitatīvs novērtējums, kas ir svarīgs noteiktu sifilisa stadiju diagnostikā un terapijas efektivitātes uzraudzībā.
Pašlaik kā antigēnus ieteicams izmantot kordilipila antigēnu (ar holesterīnu un lecitīnu bagātinātu liellopu sirds ekstraktu) un triponemālo antigēnu (ar ultraskaņu apstrādātu apatogēnu kultūras treponēmu suspensiju). Komplementa fiksācijas reakcija ar kardiolipīna un treponēmas antigēniem kļūst pozitīva pēc 2-4 nedēļām, pakāpeniski palielinās un sasniedz maksimumu (1:160 - 1:320 un vairāk) ar sekundāru svaigu sifilisu. Tad reagīna titrs pamazām krītas un sekundāra recidivējoša sifilisa gadījumā tas parasti nepārsniedz 1:180 - 1:120. Pacientiem ar terciāro sifilisu šīs reakcijas dod pozitīvu rezultātu tikai 70%.
Jāuzsver, ka CSR nav strikti specifiski attiecībā uz sifilisu un dažos gadījumos var sniegt kļūdaini pozitīvus (nespecifiskus) rezultātus tehnisku kļūdu dēļ (pilnīga hemolīze, nesterila asins ņemšana, nepietiekama laboratorijas tehniķu kvalifikācija); Viltus reakcijas tiek novērotas pacientiem ar lepru, malāriju, dažkārt ar situatīvām slimībām, audzējiem, tuberkulozi, aknu slimībām, lietojot medikamentus, kā arī grūtniecības laikā. Menstruāciju laikā utt. Nav ieteicams veikt asins analīzes pirmajā nedēļā pēc vakcinācijas, traumas, ķirurģiskas iejaukšanās, drudža apstākļos pirmajās 2 nedēļās pēc dzimšanas, jaundzimušajiem pirmajās 10 dzīves dienās, jo fizikāli ķīmiskās izmaiņas asins serumā šajos apstākļos var būt līdzīgas tām, kas novērotas pacientiem ar sifilisu.
RĪF ir balstīta uz netiešu metodi fluorescējošu antivielu noteikšanai. Antigēns šajā reakcijā ir nogalinātas kultūras Treponema pallidum suspensija, kas piestiprināta stikla priekšmetstikliņiem, uz kuriem tiek uzklāts tests un pretsugas fluorescējošs serums. RIF rezultātus nosaka fluorescējošā mikroskopā, novērtējot preparātā esošo treponēmu mirdzumu. Ar pozitīvu rezultātu treponēmai ir dzeltenīgi zaļš mirdzums, kura pakāpi norāda plusi no 1+ līdz 4+ ar negatīviem rezultātiem, treponēma nespīd. Šobrīd RIF ir uzstādīts vairākās modifikācijās (RIF - abs, RIF - 200).
RIBT, ierosināts 1949. gadā R. Nelson un M. Meyer, pamatā ir Treponema pallidum imobilizācijas fenomens ar antigēniem no pacienta asins seruma komplementa klātbūtnē. Par RIBT antigēnu izmanto gaišu dzīvu treponēmu suspensiju, kas iegūta no trušiem, kas inficēti ar sifilisu. Mobilitāti zaudējušo (imobilizēto) treponēmu skaitīšana tiek veikta mikroskopā. Reakciju rezultāti tiek vērtēti procentos no 0 līdz 20% - negatīvi, no 21 līdz 31% - apšaubāmi, no 31 līdz 50% - vāji pozitīvi, no 51 līdz 100% - pozitīvi. RIBT kļūst pozitīvs primārā sifilisa perioda beigās un saglabājas visos šīs slimības periodos un dažreiz pat pēc pilnīgas antisifiliskās ārstēšanas. RIBT var dot viltus pozitīvus rezultātus, ja testa serumā ir treponēmas vielas (antibiotikas – penicilīns, tetraciklīns), kas izraisa Treponema pallidum nespecifisku imobilizāciju. Tādēļ šīs reakcijas noteikšanai asinis nevar pārbaudīt agrāk kā 2 nedēļas pēc antibiotiku lietošanas.
Lai veiktu specifiskas seroloģiskās reakcijas (RIF un RIBT), tukšā dūšā no elkoņa vēnas ņem asinis 5-10 ml apjomā. Pēc sterilizācijas šļirci un adatu mazgā ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, un asinis ielej sausā mēģenē, lai pārbaudītu RIF, un sterilā mēģenē, lai pārbaudītu RIBT. Specifiskās seroloģiskās reakcijas uz sifilisu tiek veiktas specializētās dermatoveneroloģisko iestāžu laboratorijās.
Cerebrospinālā šķidruma izmeklēšanas rezultāti tiek novērtēti, izmantojot Robustova skalu, ko papildina jaunākie dati par RIF un RIBT ar cerebrospinālo šķidrumu. Saskaņā ar šo klasifikāciju pacientiem ar sifilisu cerebrospinālajā šķidrumā ir četras izmaiņu pakāpes.
I grāds- nelielas izolētas vai kombinētas izmaiņas cerebrospinālajā šķidrumā.
Izmaiņas cerebrospinālajā šķidrumā uzskata par nebūtiskām, ja konstatē: citoze vairāk nekā 8 šūnas uz 1 mm3, proteīns vairāk nekā 0,33%, Nonne-Apelta reakcija (++), Pandi reakcija (+++), Lange reakcija vairāk nekā divi vai viens trīs, RV vāji pozitīvs, RIF pozitīvs.
Ja tiek konstatēta viena no šīm izmaiņām, mēs runājam par atsevišķām izmaiņām cerebrospinālajā šķidrumā, bet, ja tās ir divas, mēs runājam par kombinētām izmaiņām. visbiežāk tie tiek atklāti pirms ārstēšanas pacientiem ar primāro un sekundāro sifilisu, asinsvadu neirosifilisu, dažiem pacientiem, kuri nesen pabeiguši neirosifilisa ārstēšanu, kā arī atsevišķiem subjektiem pēc kontroles perioda novērošanas.
II pakāpe– būtiskas izmaiņas cerebrospinālajā šķidrumā ar negatīviem RT un RIBT rezultātiem.
Tiek atzīmēta proteīna-šūnu disociācija (citoze ir normas robežās vai nedaudz palielināta, proteīna daudzums ir strauji palielināts, globulīna koloidālās reakcijas ir pozitīvas) vai šūnu-olbaltumvielu disociācija (pleocitoze un neliels olbaltumvielu pieaugums, Pandi un Nonne-Appelt reakcijas ir vāji pozitīvi vai negatīvi).
Šādas izmaiņas biežāk konstatē pacientiem ar dažādām sifilītiskā meningīta un meningovaskulārā sifilisa klīniskajām formām.
III pakāpe– pēkšņas izmaiņas cerebrospinālais šķidrums (šūnu-olbaltumvielu vai olbaltumvielu-šūnu disociācija, globulīna reakcijas bieži ir pozitīvas) un pozitīvi RT, RIBT un RIF rezultāti.
To nosaka pacientiem ar progresējošu agrīnu latentu vai akūtu agrīnu sifilītu meningītu, meningovaskulāru sifilisu, vēlu mezenhimālo neirosifilisu un dažiem pacientiem ar tabes dorsalis.
IV pakāpe– paralītiskā tipa izmaiņas cerebrospinālajā šķidrumā: augsts pleocitoze vai augsts proteīna saturs, globulīnu reakcijas, RV, RIF, RIBT ir pozitīvas, paralītiska tipa Lange līkne.
Šādas izmaiņas cerebrospinālajā šķidrumā ir raksturīgākās pacientiem ar progresējošu paralīzi, taboparalīzi, mazākā mērā pacientiem ar tabes dorsalis un vēl mazākā mērā pacientiem ar vēlīnu mezenhimālo neirosifilisu.
119. Pandi un Nonne - Apelt reakcijas
Kā reaģents Pandi reakcijas veikšanai tiek izmantots supernatants caurspīdīgs šķidrums, ko iegūst, enerģiski sakratot 100 g šķidrās karbolskābes ar 1000 ml destilēta ūdens. Lai iegūtu nogulsnes un dzidru šķidrumu (reaģentu), šo maisījumu vispirms ievieto termostatā uz 3-4 stundām un pēc tam 2-3 dienas tur istabas temperatūrā.
Uz tumša papīra uzliek pulksteņa stiklu vai stikla priekšmetstikliņu un uz tā uzpilina 2-3 pilienus reaģenta, pēc tam 1 pilienu cerebrospinālā šķidruma. Ja piliens kļūst duļķains vai tā perifērijā parādās pavedienam līdzīga duļķainība, reakcija tiek uzskatīta par pozitīvu.
Lai veiktu Nonne-Apelt reakciju, ir nepieciešamas tīras mēģenes, piesātināts amonija sulfāta šķīdums, destilēts ūdens un tumšs papīrs. Piesātinātu amonija sulfāta šķīdumu pagatavo šādi: 1000 ml kolbā ievieto 0,5 g ķīmiski tīra neitrāla amonija sulfāta, pēc tam ielej 100 ml destilēta ūdens, kas uzkarsēts līdz 95 ° C, krata, līdz sāls ir pilnībā izšķīdis un atstāj vairākas reizes. dienas istabas temperatūrā. Pēc 2-3 dienām šķīdumu filtrē un nosaka pH. Reakcijai jābūt neitrālai.
0,5-1 ml iegūtā šķīduma ielej mēģenē un uzmanīgi pievieno tādu pašu cerebrospinālā šķidruma daudzumu gar mēģenes sieniņu. Pēc 3 minūtēm novērtējiet rezultātu. Bālgans gredzena izskats norāda uz pozitīvu reakciju. Pēc tam mēģenes saturu sakrata, nosaka duļķainības pakāpi, salīdzinot to ar mēģeni, kurā ir destilēts ūdens. Reakcijas rezultāti tiek novērtēti uz melnā papīra fona.
120. Bordē - Džangou reakcija
Vērtīgs diagnostikas tests hroniskas gonorejas noteikšanai cilvēkiem, kuri cieš no hroniskām slimībām iekaisuma slimības uroģenitālā sistēma. Saskaņā ar literatūru, kad pareiza lietošana Ar šo metodi tiek atklāti līdz 80% gonorejas gadījumu, kas netika atklāti ar bakterioskopiskām vai bakterioloģiskām metodēm.
Bordet-Zhang reakcija var būt pēdas no iepriekšējas slimības vai gonovacīnas lietošanas diagnostikai (imunbioloģiska provokācijas metode), kā arī terapeitiskai (hronisku uroģenitālās sistēmas iekaisuma procesu ārstēšanai sievietēm saskaņā ar Bakšejevu). mērķis. Tāpēc pirms tās veikšanas ir rūpīgi jāsavāc anamnēze,
Reakcija var būt arī kļūdaini pozitīva, ja tiek ievadīts piens vai pirogenāls tiek izmantots medicīniskiem nolūkiem.
Līdz ar to pozitīva Bordeta-Džangu reakcija nav neapstrīdams pierādījums gonokoku infekcijas esamībai, tāpat kā negatīva nevar būt pierādījums gonorejas neesamībai. Tomēr pozitīviem rezultātiem ilgākā laika periodā vajadzētu likt ārstam meklēt gonokoku infekcijas avotu organismā.
Kā antigēns tiek izmantota nogalināta gonokoku kultūra, kas satur 3-4 miljardus mikrobu ķermeņu 1 ml. Gonokoku antigēnu konservē ar formaldehīda šķīdumu un ielej 1-5 ml ampulās. Neatvērtas ampulas ir piemērotas 6 mēnešus, atvērtas var uzglabāt 2-3 dienas sterilā mēģenē ledusskapī 3-5 ° C temperatūrā,
Bordet-Giangu komplementa fiksācijas reakcija tiek veikta līdzīgi kā Vasermana reakcija (sk. Nr. 121). Gonokoku antigēnu atšķaida ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu atbilstoši titram, kas norādīts uz ampulas etiķetes. Reakciju visbiežāk veic 2,5 ml tilpumā, tāpēc 0,5 ml atšķaidīta 1:5 testa seruma katrā mēģenē pievieno 0,5 ml atšķaidīta antigēna. Atlikušie 1,5 ml ir 1 ml hemolītiskās sistēmas un 0,5 ml komplementa.
Reakcija tiek uzskatīta par pozitīvu, ja testa serumā ir dažādas pakāpes hemolīzes aizkavēšanās. Kontrolē (asins serums veseliem cilvēkiem) tiek novērota pilnīga hemolīze.
121. Vasermana reakcija
Sifilisa slimnieku asins serums satur reagīnus un antivielas. Reaginiem piemīt īpašība apvienoties ar kardiolipīna antigēnu. Specifiskas antivielas pret Treponema pallidum apvienojas ar specifiskiem antigēniem. Iegūtos antigēna-antivielu kompleksus absorbē reakcijai pievienotais komplements. Indikāciju veic, ieviešot hemolītisko sistēmu (aitas sarkanās asins šūnas + hemolītiskais serums).
Lai veiktu reakciju, jums ir nepieciešams:
a) izotonisks nātrija hlorīda šķīdums;
b) ultraskaņas treponemāla (uzglabā ledusskapī +4 °C) un kardiolipīna (uzglabā istabas temperatūrā) antigēnus;
c) komplements, kas ir asins serums, kas iegūts no 5-10 veselu jūrascūciņu sirds punkcijas. Var uzglabāt ledusskapī 2 mēnešus, ar nosacījumu
konservēšana ar 4% borskābes šķīdumu un 5% nātrija sulfāta šķīdumu;
d) hemolizīns - hemolītisks truša asins serums, kas imunizēts ar aitas eritrocītiem ar dažādu titru (uzglabā ledusskapī 4 °C temperatūrā);
e) aitas sarkanās asins šūnas, kas iegūtas ar kakla vēnas punkciju. Asinis savāc sterilā burkā ar stikla bumbiņām (sajaukšanai), krata 15 minūtes. Fibrīna recekļus atdala, filtrējot caur sterilu marli. Defibrētas asinis var uzglabāt ledusskapī līdz 5 dienām.
Dažkārt rodas nepieciešamība ilgāk uzglabāt aitas asinis, un tāpēc tās tiek konservētas ar speciālu konservantu (6 g glikozes, 4,5 g borskābes, 100 ml izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma), ko vāra ūdens vannā. 20 minūtes dienā 3 dienas Uz 100 ml defibrinētu aitu asiņu nepieciešami 15 ml konservanta. Šādi konservētas defibrētas asinis tiek uzglabātas ledusskapī.
Pirms galvenā eksperimenta ir vairāki posmi.
No pacienta kubitālās vēnas paņem 5-10 ml asiņu un apstrādā serumu. Bērniem asinis var ņemt no temporālās vēnas vai iegriezuma papēžā. Punkcija tiek veikta ar steriliem instrumentiem, šļirci un adatu.
iepriekš mazgāti ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu.
Asinis pētniecībai tiek ņemtas tukšā dūšā; 3-4 dienas pirms pētījuma pacientam aizliegts lietot narkotiskās vielas, uzpirkstītes preparātus, lietot alkoholu.
Pētījumu nevajadzētu veikt pacientiem ar paaugstināta temperatūraķermenim, pēc traumām, operācijām, anestēzijas, nesenām infekcijas slimībām, sievietēm menstruāciju laikā, grūtniecēm (pēdējās 10 grūtniecības dienās), sievietēm dzemdībās (pirmajās 10 dienās pēc dzemdībām), kā arī jaundzimušajiem ( pirmajās 10 dzīves dienās).
Iegūtās asinis sterilā mēģenē ievieto termostatā 37 °C temperatūrā uz 15-30 minūtēm. Iegūto trombu atdala no mēģenes sieniņām ar sterilu stikla stienīti un uz dienu ievieto ledusskapī. Atdalīto caurspīdīgo serumu (virs recekļa) atsūc ar Pastēra pipeti, izmantojot gumijas spuldzi, vai uzmanīgi ielej citā sterilā mēģenē un 30 minūtes inaktivē ūdens vannā 56 °C temperatūrā. Šādi sagatavotu serumu eksperimentam var uzglabāt ledusskapī līdz 5-6 dienām.
Antigēnus atšķaida saskaņā ar metodi un titru, kas norādīts uz etiķetes.
Sagatavojiet hemolītisko sistēmu. Lai to paveiktu, defibrinētas aitas asinis vai sarkanās asins šūnas reakcijai nepieciešamajā daudzumā tiek centrifugētas, plazmu rūpīgi atdala un nogulsnes mazgā ar 5-6 tilpumiem izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma, līdz virspusē esošais šķidrums kļūst pilnīgi bezkrāsains. No nogulsnēm izotoniskā nātrija hlorīda šķīdumā ar trīskāršu titru sagatavo 3% sarkano asins šūnu suspensiju.
Hemolītiskā seruma šķīdumu un aitas eritrocītu suspensiju ātri sajauc un ievieto termostatā uz 30 minūtēm.
Sauso komplementu atšķaida ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu attiecībā 1:10, normālu inaktivētu cilvēka serumu - 1:5.
Komplements tiek titrēts 30 mēģenēs, kas novietotas statīvā ar 10 mēģenēm 3 rindās. Divās rindās to titrē divu antigēnu klātbūtnē, trešajā - ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu. Piecas mēģenes ir kontroles mēģenes: divas atbilstošajiem diviem antigēniem un viena komplementa, hemolītiskā seruma un izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma hemotoksicitātes kontrolei; aizpildiet tos šādi:
Reaģenti, ml | Mēģeņu rinda |
||||
3% aitu sarkano asins šūnu suspensija | |||||
hemolītiskais serums, atšķaidīts ar trīskāršu titru | |||||
Papildinājums 1:10 | |||||
Triponēmālais antigēns, kas atšķaidīts atbilstoši titram | |||||
Kardiolipīna antigēns, kas atšķaidīts atbilstoši titram | |||||
Izotonisks nātrija hlorīda šķīdums |
Mēģenes ievieto termostatā uz 45 minūtēm, pēc tam tās pārbauda. Nevienā mēģenē nedrīkst būt hemolīze.
Komplementu atšķaidījumā 1:10 ielej 10 statīva 1. rindas mēģenēs devās: 0,1, 0,16, 0,2, 0,24, 0,3, 0,36, 0,4, 0,44, 0,5 un 0,55 ml. Katras mēģenes saturam pievieno izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu līdz 1 ml un rūpīgi samaisa. 0,25 ml maisījuma no katras mēģenes pārnes uz attiecīgajām 2. un 3. rindas mēģenēm. Statīvu ar mēģenēm sakrata, 3. mēģeņu rindā pievieno 0,5 ml hemolītiskās sistēmas, vēlreiz sakrata un ievieto termostatā 37 °C uz 45 minūtēm. Cilvēka parasto asins serumu, kas atšķaidīts ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu proporcijā 1:5, ielej visās 30 mēģenēs, katrā pa 0,25 ml.
Antigēns I (treponēma ultraskaņa), kas atšķaidīts ar titru ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, pievieno 0,25 ml 10 pirmās rindas mēģenēm; antigēns II (kardiolipīns tādā pašā atšķaidījumā un tādā pašā daudzumā) - 10 mēģenēs no 2. rindas. 10 3. rindas mēģenēs ielej 0,25 ml izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma, atlikušos 0,25 ml izlej. Pēc inkubācijas termostatā 0,5 ml hemolītiskās sistēmas pievieno 20 mēģenēm (1. un 2. rinda), sakrata un atkārtoti ievieto termostatā uz 45 minūtēm.
Pēc 45 minūtēm tiek noteikta komplementa darba deva, tas ir, tā titrs ar pieaugumu par 15-20%.
Komplementa titrs tiek uzskatīts par tā minimālo daudzumu, kas izraisa pilnīgu aitas sarkano asins šūnu hemolīzi antigēna un normāla cilvēka asins seruma klātbūtnē.
Galvenais eksperiments ir tāds, ka katru testa inaktivēto serumu, kas atšķaidīts ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu proporcijā 1:5, ielej 0,25 ml trīs mēģenēs. Pirmajai mēģenei pievieno 0,25 ml antigēna I, otrai 0,25 ml antigēna II un trešajai (kontrolei) 0,25 ml izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma. Visām mēģenēm pievieno arī 0,25 ml komplementa, kas atšķaidīts līdz darba devai. Visas mēģenes ievieto termostatā uz 45 minūtēm, tad tām pievieno 0,5 ml hemolītiskās sistēmas, sakrata un ievieto termostatā uz 45-50 minūtēm. Eksperimenta rezultāts tiek reģistrēts pēc pilnīgas hemolīzes sākuma kontroles mēģenēs.
Reakcijas rezultāti tiek vērtēti kā plusi: pilnīga hemolīzes aizkavēšanās (spēcīgi pozitīva reakcija) ++++, nozīmīga (pozitīva reakcija) +++, daļēja (vāji pozitīva reakcija) ++, nenozīmīga (apšaubāma reakcija) - ±, nav hemolīzes aizkavēšanās (negatīva reakcija) - .
Kvantitatīvā Wassermann reakcijas veikšanas metodē eksperimentu veic ar seruma tilpuma samazināšanos, kas atšķaidīts ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu.
Vasermana reakcijas galvenā eksperimenta shēma
Sastāvdaļas (ml). Kopējais tilpums 1,25 ml | Cauruļu skaits |
||
Testa serums ir inaktivēts, atšķaidīts proporcijā 1:5 Antigēns I (treponemāls), atšķaidīts pēc titra Antigēns II (kardiolipīns), atšķaidīts ar titru Izotonisks nātrija hlorīda šķīdums Papildinājums atšķaidīts atbilstoši darba devai | |||
Vasermana reakcijas klīnisko nozīmi ir grūti pārvērtēt. To veic visiem pacientiem pirms ārstēšanas, bet īpaši svarīgi tas ir latenta sifilisa, bojājumu gadījumā iekšējie orgāni un nervu sistēma.
Vasermana reakcijas rezultāti raksturo sniegtās ārstniecības kvalitāti, kas dod pamatu ārstētos pacientus izņemt no uzskaites noteiktā laika periodā.
Primārā sifilisa gadījumā Vasermana reakcija parasti ir pozitīva 6. nedēļas beigās no inficēšanās brīža; ar sekundāru svaigu sifilisu tas ir pozitīvs gandrīz 100% gadījumu, ar sekundāru recidivējošu sifilisu - 98-100% gadījumu; terciārais aktīvs - 85%; terciārā slēptā - 60% gadījumu.
Vasermana reakcija tiek veikta divas reizes visām grūtniecēm, pacientiem ar somatiskām, nervu, garīgām un ādas slimības, kā arī noteiktās populācijas. Tajā pašā laikā pozitīvi un vāji pozitīvi reakcijas rezultāti jāizturas kritiski, jo tie var rasties grūtniecības beigās un pēc dzemdībām, ar hipertireozi, malāriju, spitālību, ļaundabīga audzēja sabrukšanu, infekcijas slimībām, kolagenozi utt. , ja klīniskās izpausmes Vispirms jāņem vērā viņu slimības, kā arī bakterioskopijas dati.
Tajā pašā laikā ir faktori, kas var izkropļot iegūto Vasermana reakcijas rezultātu patieso būtību: slikti mazgāti laboratorijas stikla trauki (skābes un sārmu pēdas mēģenēs), ilgstoša pētniecībai paņemto asiņu uzglabāšana, tauki un alkohols, ko pacienti lieto pirms pārbaudes, menstruāciju u.c.
Visos gadījumos ir vēlams veikt visaptverošu pacienta izmeklēšanu, tostarp papildus Vasermana reakcijai arī RIBT (skatīt 122, 123, 124) utt.
122. Saksa-Vitebska reakcija (citoholiskā)
Izmanto sifilisa noteikšanai. Tas ir balstīts uz nogulšņu veidošanos, sajaucot pacienta asins serumu ar antigēnu.
Lai sagatavotu antigēnu, vairāku liellopu siržu muskuļus attīra no cīpslām, fascijām un taukiem, samaļ gaļas mašīnā un ekstrahē ar 5-kārtīgu 96% etilspirta tilpumu 15 dienas, katru dienu 20 minūtes kratot. Iegūto ekstraktu iztvaicē ūdens vannā porcelāna kausā vakuumā. Atlikumam (spilgti dzeltenai lipoīdu masai) pievieno karstu 96% etilspirtu 1/3 no tilpuma, kas ņemts muskuļu ekstrakcijai.
Ekstraktu notur 3 dienas istabas temperatūrā, filtrē (aukstā ūdenī) un pievieno 0,3-0,6% kristāliskā holesterīna šķīdumu atkarībā no titrēšanas rezultātiem ar pozitīviem un negatīviem serumiem. Uzglabājiet citoholisko antigēnu istabas temperatūrā noslēgtās ampulās vai mēģenēs ar aizbāzni.
Metodoloģija. 1 ml citoholiskā antigēna ātri pievieno 2 ml izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma un atstāj istabas temperatūrā 15 minūtes, līdz parādās pārslas. Mēģenē pievieno 0,1 ml antigēnu emulsijas 0,2 ml inaktivēta seruma, krata 3 minūtes un atstāj uz 30 minūtēm, pēc tam pievieno 1 ml izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma.
Pievienojiet 1,2 ml izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma un 0,1 ml antigēna emulsijas kontroles mēģenē ar antigēnu. Kontrolē nedrīkst būt pārslu. Reakcijas rezultātus ņem vērā vizuāli vai ar palielināmo stiklu un atkarībā no izkrītošo pārslu skaita apzīmē ar plusiem (++++, +++, ++). Ja reakcija ir negatīva, pārslu nav, bet mēģenes saturs var kļūt nedaudz opalescējošs.
1931. gadā P. Sakss un E. Vitebskis ierosināja šīs tehnikas modifikāciju, kas sastāv no antigēna atšķaidīšanas divās fāzēs: 1 daļai antigēna pievieno 2 daļas izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma, 5 minūtes patur istabas temperatūrā un pievieno vēl 9 daļas izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma. Antigēnu ieteicams arī atšķaidīt ar 2% nātrija hlorīda šķīdumu, kas, pēc autoru domām, palielina reakcijas jutību. Iespējama arī reakcijas kvantitatīvā modifikācija ar seruma atšķaidīšanu (1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 utt.).
Reakcija ir diezgan jutīga, aizņem maz laika (apmēram 1 stundu), un tās rezultāti tiek nolasīti nekavējoties.
123. Treponema pallidum (RIBT) imobilizācijas reakcija
Izmantojot reakciju, sifilisa slimnieku asins serumā tiek noteiktas antivielas un komplements, kas imobilizē Treponema pallidum.
Primārā sifilisa gadījumā RIBT pārsvarā ir negatīvs, sekundārā - pozitīvs 92-96% gadījumu, terciārā - 92-100%, nervu sistēmas un iedzimtā sifilisa gadījumā - 86-89% gadījumu.
Pozitīvi RIBT rezultāti tika novēroti sarkoidozes, eritematozes, diabēta, ļaundabīgi audzēji, vīrusu hepatīts, aknu ciroze, malārija, spitālība, infekciozā mononukleoze, dažas karsto valstu slimības (pinta, žagatas utt.).
Antigēns ir gaišas treponēmas suspensija, kas ņemta no sifilisu inficēta truša sēkliniekiem, sēkliniekos ievadot 0,75-1 ml gaišas treponēmas suspensijas izotoniskā nātrija hlorīda šķīdumā (50 dzīvnieki vienā redzes laukā).
Materiāls no sēklinieka jāņem 6-8 dienas pēc dzīvnieka inficēšanās. Pirms antigēna lietošanas trusis tiek nogalināts ar asiņošanu (sirds punkcija vai miega artērija). Sēklinieku audus sasmalcina un piepilda ar vesela truša asins serumu, atšķaida ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, krata -30 minūtes un pēc tam centrifugē 10 minūtes (1000 apgr./min.). Supernatanta šķidrumu pārbauda mikroskopiski. Katrā redzes laukā jābūt vismaz 10-15 Treponema pallidums.
Komplementu gatavo parastajā veidā no jūrascūciņu asinīm.
Lai veiktu RIBT, nepieciešams: 1,2 ml 0,2% želatīna šķīduma, 2,8 ml 5% albumīna šķīduma, 1,6 ml Treponema pallidum suspensijas; Vides pH ir 7,2. Šim maisījumam pievieno 0,15 ml komplementa (kokteiļa). Paralēli tiek veikti divi testi: ar aktīvo (eksperimenta) un reaktīvo (kontroles) komplementu.
Melangeurus piepilda ar testa serumu līdz atzīmei “1”, pēc tam ar kokteili līdz atzīmei “2” un aizver ar sterilu gumijas gredzenu.
Tajā pašā laikā līdzīga reakcija tiek veikta ar acīmredzami pozitīviem un acīmredzami negatīviem serumiem.
Melangeurus numurē un ievieto termostatā 35 °C temperatūrā uz 18-20 stundām, pēc tam tos pa pāriem izņem no termostata (eksperiments - kontrole) un saturu ielej attiecīgajās mēģenēs. Uz stikla priekšmetstikliņa tiek uzklāti 2 pilieni: kreisajā pusē ir eksperiments, labajā pusē ir kontrole, pārklāj ar vāku un mikroskopu tumšā redzes laukā.
Pirmkārt, tiek pētīti kontroles rezultāti: tiek noteikts kustīgās un nekustīgās Treponema pallidum procentuālais daudzums. Aprēķina formula: X = (A - B)/A * 100, kur A ir kustīgās pallidum treponēmas skaits kontrolē; B - mobilo Treponema pallidums skaits eksperimentā.
Piemērs: (24–19) / 24 * 100 = 21%.
RIBT rezultātu novērtējumi: zem 20% - negatīvi. 21-30% - šaubīgi, 31-50% - vāji pozitīvi, virs 50% - pozitīvi.
Literatūra
... (neinvazīvs metodes diagnostika, ... 6 (12,5%), hroniska slimības uroģenitālais trakts (prostatīts... ĀDA UN VENERĒLIS SLIMĪBAS galvenajā grupā ārstēja 4,1% slims...sākotnēji pārbaudītsslims in... ekonomiski, un metodoloģija vienkārši un...