Problemy diagnostyki serologicznej kiły. Interpretacja wyników badań serologicznych. Nowoczesne laboratoryjne metody i algorytmy diagnozowania kiły Identyfikacja i postępowanie w diagnostyce kiły

Kiła jest chorobą zakaźną wywoływaną przez krętki Treponema pallidum, ze skłonnością do postępującego przewlekłego przebiegu, z wyraźną periodyzacją objawów klinicznych.

Przewaga transmisji płciowej nad kontaktową i przezłożyskową stawia tę chorobę w szeregu chorób przenoszonych drogą płciową (STD, STI). Oprócz tych metod przenoszenia infekcji szczególną rolę odgrywa droga sztuczna (z łac. „artificio” – sztucznie wytworzona).

Jest to typowe dla placówek medycznych, realizowane głównie w warunkach szpitalnych. Zakażenie występuje podczas transfuzji krwi, różnych operacji chirurgicznych, inwazyjnych metod diagnostycznych.

Pomimo kwarantanny krwi dawcy, problem wykrywania kiły u dawców na różnych etapach choroby jest nadal aktualny.

Dlatego środki diagnostyczne dla kiły wymagają standaryzacji, wprowadzenia nowych czułych i informacyjnych metod identyfikacji, a także minimalizacji błędów i błędnej interpretacji wyników badań.

Pokaż wszystko

1. Klasyfikacja laboratoryjnych metod diagnostycznych

Diagnoza kiły ma pewne cechy i różni się od diagnozy innych infekcji bakteryjnych. Złożona budowa i właściwości antygenowe bladego treponemy powodują błędy w interpretacji wyników badań serologicznych.

Badanie krwi na kiłę oferowane jest 3 głównym grupom pacjentów:

1. 1 Przesiewowe i profilaktyczne badania lekarskie grup ludności (w tym ciąża, rejestracja w poradni przedporodowej, przyjęcie do pracy i rejestracja książki medycznej itp.).
2. 2 Badania przesiewowe w grupach ryzyka (seks bez zabezpieczenia z osobą zarażoną kiłą, osobami po wymuszonym kontakcie seksualnym, zakażonymi wirusem HIV itd.).
3. 3 Osoby z objawami lub z podejrzeniem zakażenia syfilitycznego.

Wszystkie metody laboratoryjne są warunkowo podzielone na bezpośrednie i pośrednie.

1.1. Metody bezpośrednie

1. 1 Identyfikacja Treponema pallidum w ciemnym polu (mikroskopia ciemnego pola).
2. 2 Zakażenie zwierząt doświadczalnych (hodowla na zwierzętach laboratoryjnych).
3. 3 PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy).
4. 4 sonda DNA lub hybrydyzacja kwasy nukleinowe.

1.2. Metody pośrednie

Reakcje serologiczne to laboratoryjne metody diagnostyczne oparte na wykrywaniu przeciwciał (w skrócie AT) na antygeny bladego treponemy (w skrócie AG). Są niezbędne do potwierdzenia diagnozy.

1. 1 Testy bez krętków:
   • reakcja Wassermana (RSK);
   • reakcja mikroprecypitacji (MR, RMP) i jej analogi, które podano poniżej;
   • Szybki test reagin w osoczu (RPR, RPR);
   • Test z czerwoną toluidyną i surowicą (TRUST);
   • Test bezkrętkowy Pracowni Badań Chorób Przenoszonych Drogą Płciową - VDRL.
2. 2 testy krętkowe:
   • R-tion unieruchomienia Treponema pallidum - RIBT / RIT;
   • R-tion immunofluorescencji - RIF, FTA (rozcieńczenie surowic RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
   • R-tion biernej hemaglutynacji (RPHA, TRPGA, TPHA);
   • ELISA (ELISA, EIA);
   • Immunoblotting.



Rysunek 1 - Algorytm serodiagnostyki kiły

1.3. Metody histomorfologiczne

Metody te sprowadzają się do identyfikacji cech histomorfologii objawów syfilitycznych. Zwrócono uwagę na subtelności struktury twardego chancre. Jednak diagnostyka różnicowa infekcji za pomocą histologii jest bardzo trudna. Histomorfologię stosuje się z innymi testami laboratoryjnymi i klinicznymi.

2. Mikroskopia ciemnego pola Treponema pallidum

Metoda ta opiera się na bezpośrednim wykryciu bladego treponemy w badanym materiale za pomocą mikroskopu i specjalnych urządzeń (najczęściej wyładowanie nadżerek i owrzodzeń, rzadziej płynu mózgowo-rdzeniowego i innych substratów).

Za pomocą skaryfikacji, skrobania, wyciskania z nadżerek i ubytków wrzodziejących uzyskuje się wysięk, a następnie przygotowany preparat bada się pod mikroskopem.

Zwykle w preparacie uzyskanym z wrzodu, z ognisk wtórnej świeżej, wtórnej kiły nawrotowej, a także przesunięć węzłów chłonnych, łożyska wykrywane są blade krętki.

Oparta na zjawisku świecenia małych cząstek w ciemnym polu po uderzeniu wiązką światła (zjawisko Tyndalla), metoda doskonale pozwala odróżnić czynnik sprawczy kiły od innych krętków na podstawie różnic morfologicznych i różnic w sposobach bakteria się porusza.

Do mikroskopii stosuje się specjalny kondensor ciemnego pola o odpowiedniej rozdzielczości optycznej. Lek otrzymywany jest metodą kruszonej kropli (kroplę materiału nanosi się na czysty, odtłuszczony szkiełko i przykrywa bardzo cienkim szkiełkiem nakrywkowym).

Na szkiełko nakrywkowe wlewa się olejek immersyjny. Obracając tubus i obracając soczewkę powiększającą, można regulować żądane oświetlenie.

W ciemnym polu mikroskopu wykrywane są krwinki, komórki nabłonkowe i czynnik wywołujący kiłę. Blada treponema wygląda jak spirala, bardzo cienka, promieniująca srebrzystym kolorem, z płynnymi ruchami.



Rycina 2 – Mikroskopia ciemnego pola jako sposób uwidocznienia bladego krętnika w badanym materiale. Źródło obrazu - CDC

Treponema pallidum należy odróżnić od innych treponemów, w tym Tr. refringens, które można znaleźć w błonie śluzowej części ustnej gardła i narządów płciowych. Ta bakteria wykonuje chaotyczne ruchy, ma szerokie i asymetryczne, raczej szorstkie loki. Ponadto odróżnia się Treponema pallidum od Tr. Microdentium, Tr. Buccalis i Tr. Wincentego.

Wizualizacja bakterii w ciemnym polu jest czasami uzupełniana reakcją fluorescencyjną. W tym celu do materiału natywnego dodaje się przeciwciała przeciwkrętkowe znakowane barwnikiem fluorescencyjnym. Tworzy to kompleks zwany antygenem-przeciwciałem (w skrócie AG-AT), który jest przedmiotem badań pod mikroskopem fluorescencyjnym.

3. Metoda reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR)

PCR, opracowany w 1991 roku do wykrywania cząsteczki kwasu dezoksyrybonukleinowego (DNA) treponema pallidum, jest bardzo czuły i specyficzny, umożliwiając wykrycie fragmentów DNA patogenu.

Analiza ta opiera się na kopiowaniu krótkich odcinków DNA krętka pallidum, które spełniają określone parametry i są obecne w próbce. Wszystko to odbywa się w sztucznych warunkach (in vitro). Reakcja zachodzi w urządzeniu – wzmacniaczu, który zapewnia periodyzację cykli temperaturowych. Następuje chłodzenie, a następnie podgrzewanie probówek z błędem 0,1˚С.

Matryca DNA jest podgrzewana przez 2 minuty w temperaturze 92-98°C (temperatura maksymalna jest stosowana, jeśli polimeraza jest termostabilna). Po podgrzaniu nici DNA rozchodzą się z powodu rozpadu wiązań wodorowych między nimi. W etapie przyłączania temperatura reakcji jest obniżana w celu związania startera z jednoniciową matrycą.

Wyżarzanie trwa około 30 sekund, podczas których syntetyzowane są setki nukleotydów. Nowo zsyntetyzowane cząsteczki są kopiowane przez polimerazę, w wyniku czego specyficzne fragmenty kwasu dezoksyrybonukleinowego wzrastają wielokrotnie. Następnie wykrywanie fragmentów odbywa się za pomocą elektroforezy w żelu agarowym.

Diagnostyka PCR kiły ma nadal charakter eksperymentalny, ale jest uzasadniona w przypadku wykrycia wrodzonej infekcji, w trudnych przypadkach diagnostycznych lub przy minimalnej zawartości bladego krętków w badanym materiale.

4. Hybrydyzacja DNA

Hybrydyzacja DNA jest przeprowadzana in vitro i polega na całkowitym lub częściowym połączeniu dwóch jednoniciowych cząsteczek DNA w jedną cząsteczkę. W przypadku pełnego dopasowania komplementarnych fragmentów połączenie jest łatwe. Jeśli dopasowanie komplementarne jest częściowe, asocjacja łańcuchów DNA zachodzi powoli. Na podstawie czasu fuzji łańcuchów można oszacować stopień komplementarności.

Gdy DNA jest podgrzewane w roztworze buforowym, wiązania wodorowe są zrywane przez uzupełniające się zasady azotowe, w wyniku czego łańcuchy DNA rozchodzą się. Następnie z dwóch zdenaturowanych kwasów dezoksyrybonukleinowych otrzymuje się preparat. Po ochłodzeniu jednoniciowe regiony ulegają renaturacji. Powstaje tak zwana hybryda DNA.

Metoda umożliwia ocenę i analizę szybkości wyżarzania z uwzględnieniem cech (podobieństwa i różnic) DNA między gatunkami lub w obrębie gatunku.

Zastosowanie sondy DNA polega na hybrydyzacji znakowanego fragmentu DNA z określonym regionem DNA w celu zidentyfikowania komplementarnych sekwencji nukleotydowych. Do znakowania sondy używa się grupy nienasyconych atomów (chromofory) lub izotopów promieniotwórczych.

Sonda DNA służy do heterogenicznego i homogenicznego wykrywania kwasów nukleinowych. Rolą sondy jest określenie obszarów, w których nastąpiła fuzja cel-sonda. Wykrywanie w jednorodnym systemie ma tę zaletę, że umożliwia śledzenie hybrydyzacji cząsteczek DNA w czasie rzeczywistym.

Istota metody sprowadza się do denaturacji i renaturacji DNA (reunifikacja łańcuchów DNA). Proces renaturacji sondy kwasu nukleinowego i DNA kończy się powstaniem „hybrydy”.

Specyficzne sekwencje kwasu nukleinowego hybrydyzują z sondą DNA, dzięki czemu są wykrywane i umożliwiają oszacowanie ilości DNA w badanym materiale.

5. Zakażenie zwierząt laboratoryjnych

Wysoka wrażliwość królików na Treponema pallidum (około 99,9%) pozwala na ich zastosowanie w diagnostyce infekcji syfilitycznej.

Zakażenie królików przeprowadzane jest w ośrodkach naukowych i jest „złotym standardem” oceny wrażliwości innych metod.

Wróćmy do testów krętkowych i niekrętkowych, ponieważ są one używane najczęściej. Rozważ ich zalety i wady, a także błędy w interpretacji wyników.

6. Testy bez krętków

To są testy do ustalenia przeciwciała IgG i IgM do znormalizowanego antygenu kardiolipiny. Ich istotną wadą jest ich stosunkowo niska specyficzność.

Niski koszt i łatwość wykonania pozwalają zaklasyfikować te testy jako przesiewowe testy diagnostyczne niezbędne do ustalenia wstępnej diagnozy i badań przesiewowych wśród populacji.

Są to testy bez krętków, które wykonuje się podczas rejestracji książki medycznej, ubiegania się o pracę, rejestracji w poradni przedporodowej.

Niedogodności:

1. 1 Minimalna czułość w stadium kiły pierwotnej - 70%;
2. 2 Minimalna czułość w stadium późnej kiły - 30%;
3. 3 Możliwość wyników fałszywie ujemnych i fałszywie dodatnich;
4. 4 Złożoność wdrożenia RSC.

Zalety:

1. 1 Stosunkowo niski koszt produkcji testowej;
2. 2 Uzyskaj szybką odpowiedź;
3. 3 Możliwość ich zastosowania do badań przesiewowych.

Uzyskanie próbek fałszywie dodatnich lub słabo dodatnich jest możliwe w następujących przypadkach:

1. 1 Naruszenie technologii wykonawczej przy blokowaniu kompleksu AG-AT.
2. 2 Pacjent ma choroby autoimmunologiczne (reumatoidalne zapalenie stawów, reumatyzm, twardzina, toczeń rumieniowaty układowy, sarkoidoza itp.).
3. 3 Nowotwory złośliwe.
4. 4 Infekcje wirusowe i bakteryjne.
5. 5 Choroby endokrynologiczne (autoimmunologiczne zapalenie tarczycy, cukrzyca).
6. 6 Ciąża.
7. 7 Picie alkoholu.
8. 8 Jedzenie tłustych potraw.
9. 9 lat.

Jak widać z listy, jest wystarczająco dużo powodów do błędnego wyniku. Dlatego należy do niego podchodzić z dużą ostrożnością. Rozważmy jeszcze dwie próbki wraz z RSC. Jest to reakcja mikroprecypitacji i VDLR (jej modyfikacja).

7. Reakcja wiązania dopełniacza (RSK, Wasserman, RW)

Jest to test oparty na zdolności dopełniacza do wiązania się z kompleksami AG-AT. Powstały kompleks jest identyfikowany za pomocą systemu hemolitycznego. Antygen kardiolipiny znacząco zwiększa czułość próbki.

Wrażliwa jest reakcja Colmera, polegająca na wykonywaniu w różnych warunkach temperaturowych. Tak więc pierwsza faza reakcji Colmera przebiega w temperaturze 20˚С przez pół godziny, druga faza w temperaturze 4-8˚С przez 20 godzin. W tym czasie następuje wiązanie dopełniacza.

Podczas wykonywania RSK możliwe jest uzyskanie bardzo pozytywnych wyników. Powodem jest prawdopodobnie duże miano przeciwciał w nierozcieńczonej surowicy. W takim przypadku próbki są umieszczane z malejącymi dawkami.

Aby zróżnicować etapy kiły i ocenić skuteczność leczenia przeciwkiłowego, określa się ilość przeciwciał w surowicy.

Pozytywność próbki ocenia się za pomocą krzyżyków; również w reakcjach Wassermana, Colmera i Canna wskazane jest rozcieńczenie surowicy.

8. Reakcja mikroprecypitacji

Ze względu na dużą złożoność wykonywania powyższych badań opracowano przyspieszoną metodę serodiagnostyki kiły, tzw. metodę ekspresową, reakcję mikroprecypitacji (w skrócie MR, RMP), dla szerokiego zakresu badań lekarskich różnych grup populacji .

Jest wykonywany z antygenem kardiolipiny i zaróbkami. Jego zaletą jest pobieranie krwi obwodowej do badań. Przyspiesza to znacznie zarówno samą technikę, jak i pracę asystentów laboratoryjnych.



Rysunek 2 - Reakcja mikroprecypitacji (schemat)

MR wymaga osocza lub inaktywowanej surowicy pacjenta (zawierają przeciwciała). Następnie osocze umieszcza się w zaznaczonych dołkach. Następnie do badanego materiału dodaje się kroplę antygenu kardiolipiny, miesza i wstrząsa. W efekcie w surowicy zarażonej osoby pojawiają się charakterystyczne płatki o różnej intensywności.

To jest test jakości. Do oznaczenia ilościowego stosuje się 10 rozcieńczeń surowicy umieszczonych w 10 odpowiednio oznakowanych dołkach. W jakościowej MR odpowiedź jest wskazana w postaci krzyżyków (plusów) lub minusów, w ilościowej MR wskazane jest miano przeciwciał (1:2, 1:4 i tak dalej).

Obecność płatków uważana jest za odpowiedź pozytywną lub słabo pozytywną. Pojawienie się kłaczków jest również możliwe przy braku choroby, dlatego ostateczną ocenę uzyskanego wyniku przeprowadza się po badaniu kontrolnym lub innych reakcjach (RIBT, RIF, ELISA, RPHA).

9. VDR

Zalecana przez Światową Organizację Zdrowia metoda wywołania reakcji z antygenem o charakterze lipidowym (AH) jest słusznie uważana za najlepszą spośród innych standardowych testów niekrętkowych. Opracowany w USA, Georgia w laboratorium chorób wenerycznych (Veneral Diseases Research Laboratories).

Skrót instytucji posłużył jako nazwa próbki – VDRL. VDRL to modyfikacja MP. Surowicę od pacjenta z kiłą inaktywuje się i umieszcza na szkiełku. Użyty antygen składa się z kardiolipiny, cholesterolu i lecytyny w różnych procentach. Odpowiedź jest rejestrowana niemal natychmiast.

Wyraźna flokulacja występuje w obecności przeciwciał w surowicy. Serum reaguje 4 tygodnie po zakażeniu. Aby ocenić ilość przeciwciał, surowicę wstępnie rozcieńcza się wykładniczo.

Zalety VDR:

1. 1 stosunkowo wysoka czułość;
2. 2 stosunkowo wysoka specyficzność;
3. 3 łatwość wykonania;
4. 4 niski koszt odczynników;
5. 5 uzyskać szybką odpowiedź.

Wadą VDRL jest stosunkowo wysoki odsetek wyników fałszywie pozytywnych.

Ich przyczynami są wszystkie te same choroby wymienione powyżej.

Testy krętkowe wykonuje się ze specyficznymi antygenami Treponema pallidum. Są one niezbędne i obowiązkowe do ustalenia ostatecznej diagnozy. Jest to reakcja immunofluorescencyjna (RIF), pośrednia reakcja hemaglutynacji (IPHA), test immunoenzymatyczny (ELISA) itp.

Po pozytywnym wyniku próby bezkrętkowej (RPR, MP, VDRL) zawsze należy wykonać próby krętkowe (częściej kombinację - RPHA, ELISA, RIF).

Testy krętkowe są trudniejsze do wykonania niż szybkie testy i kosztują więcej pieniędzy.

10. RIF

Ta reakcja (w skrócie RIF) służy do diagnozowania kiły, w tym postaci utajonych, oraz do ponownego sprawdzania próbek dodatnich i fałszywie dodatnich.

RIF opiera się na blasku znakowanych przeciwciał w połączeniu z kompleksem antygen-przeciwciało pod lampą kwarcową. Metoda zaczęła być stosowana w latach 60. i wyróżniała się łatwością wdrożenia oraz wysoką specyficznością (która jest nieco gorsza od RIBT).

Posiada kilka modyfikacji: RIF-10, RIF-200 i RIF-abs.

Najbardziej czuły RIF w rozcieńczeniu jest 10 razy, a reszta jest bardziej specyficzna. RIF odbywa się w dwóch fazach. Surowica krwi pacjenta jest dodawana do AG. Powstaje kompleks AG-AT, który jest badany w kolejnej fazie. Kompleks znakowany fluorochromem jest następnie identyfikowany mikroskopowo. Brak poświaty wskazuje na brak swoistych przeciwciał w surowicy krwi.

RIF-200 jest najcenniejszym ze wszystkich rozcieńczeń. Metoda przeznaczona jest do diagnozowania różnych postaci kiły, zwłaszcza kiły utajonej, oraz ponownego sprawdzania próbek dodatnich.

11. RIBT

Reakcja unieruchomienia Treponema pallidum (w skrócie RIBT, RIT) jest jednym ze skomplikowanych badań serologicznych, które wymagają znacznego wysiłku i nakładów finansowych. RIBT jest coraz rzadziej stosowany, ale jego znaczenie pozostaje w diagnostyce kiły utajonej.

Ma ogromne znaczenie w rozpoznawaniu wyników fałszywie dodatnich u kobiet w ciąży i polega na unieruchomieniu bakterii w obecności immobilizyn – przeciwciał późnych.

Wynik jest oceniany na podstawie procentu (%) unieruchomionego krętnika za pomocą specjalnej tabeli:

1. 1 Od 0 do 20 - test negatywny.
2. 2 Od 21 do 50 - test słabo pozytywny.
3. 3 Od 50 do 100 - reakcja pozytywna.

Fałszywie pozytywne wyniki są również możliwe w przypadku RIBT. Tak więc błędna odpowiedź jest możliwa w przypadku infekcji tropikalną trepanemą, a także gruźlicą, marskością wątroby, sarkoidozą i starcami.

12. RPG

To badanie krwi na kiłę nazywa się pasywnym testem hemaglutynacji (w skrócie krew dla TPHA, TPHA).

Antygen dla TPHA jest przygotowywany z erytrocytów barana pokrytych fragmentami bladego treponemy (uzyskanych z zakażonych królików (patrz Figura 4). Do analizy wykorzystuje się krew żylną (osocze lub inaktywowaną surowicę) pacjenta.

Po dodaniu antygenu do surowicy pacjenta z kiłą powstaje kompleks AG-AT, który prowadzi do aglutynacji czerwonych krwinek. aglutynację określa subiektywnie asystent laboratoryjny.



Rysunek 3 - Schemat RPHA (pasywna reakcja hemaglutynacji)

Próbka jest oceniana jako pozytywna, gdy pojawiają się aglutynaty o jednorodnym różowym kolorze. Czerwony kolor osadu wskazuje na odkładanie się erytrocytów. RPHA jest bardzo wrażliwy i wysoce specyficzny.

12.1. Reakcja mikrohemaglutynacji

Jest to uproszczona wersja RPGA. Różni się od próbki opisanej powyżej, że zawiera mniej antygenu, rozcieńczalnika i surowicy krwi do przeprowadzenia reakcji. Próbkę można ocenić 4 godziny po inkubacji surowicy. Jest stosowany w badaniach przesiewowych i masowych na kiłę.

13. Test immunoenzymatyczny

Test immunoabsorpcji enzymatycznej (w skrócie ELISA) opiera się na specyficznej reakcji antygen-przeciwciało. Materiał biologiczny (surowica krwi pacjenta, płyn mózgowo-rdzeniowy) wprowadza się do studzienek, na których powierzchni stałej utrwalane są antygeny bladego krętnika. Materiał testowy jest inkubowany, a następnie przeciwciała, które nie związały się z antygenami, są wypłukiwane (patrz Ryc. 5).

Identyfikację powstałego kompleksu przeprowadza się na etapie fermentacji przy użyciu surowicy odpornościowej znakowanej enzymem. Podczas reakcji chemicznej enzym barwi powstałe kompleksy. Intensywność barwienia zależy od ilości swoistych przeciwciał we krwi pacjenta i jest rejestrowana przez spektrofotometr.



Rysunek 4 - Schemat testu ELISA (test immunoenzymatyczny)

Czułość testu ELISA wynosi ponad 95%. Metoda jest stosowana w trybie zautomatyzowanym do badania określonych grup populacji: dawców, kobiet w ciąży i innych, w celu wyjaśnienia diagnozy w przypadku dodatnich i fałszywie dodatnich testów niekrętkowych.

14. Immunoblotting

Immunoblotting to bardzo czuła metoda, modyfikacja prostego testu ELISA. Reakcja opiera się na elektroforezie z oddzieleniem bladych antygenów treponema.

Oddzielone immunodeterminanty są przenoszone na bibułę nitrocelulozową i pokazywane w teście ELISA. Surowica jest następnie inkubowana, a niezwiązane przeciwciała są wypłukiwane. Powstały materiał poddaje się działaniu immunoglobulin znakowanych enzymatycznie (IgM lub IgG).

15. Kliniczna ocena wyników diagnostyki laboratoryjnej kiły

W tabeli 1 poniżej podaliśmy możliwe wyniki analiz i ich interpretację. Jak widać w tabeli, główną wartością w rozszyfrowaniu jest kompleksowa ocena testów.



Tabela 1 - Odszyfrowanie wyników reakcji serologicznych (badania krwi na kiłę). Kliknij tabelę, aby wyświetlić

Reaktywność testów oceniana jest również za pomocą „krzyżyków”:

1. 1 Maksymalna odpowiedź (test silnie pozytywny) jest oznaczona 4 krzyżykami.
2. 2 Pozytywna próbka jest oznaczona 3 krzyżykami.
3. 3 Słabo pozytywną reakcję wskazują dwa krzyżyki.
4. 4 Jeden krzyżyk wskazuje na wynik wątpliwy i negatywny.
5. 5 Odpowiedź negatywna jest oznaczona znakiem minus.

Problem optymalizacji diagnostyki laboratoryjnej kiły nie stracił dotychczas na aktualności. Nowoczesne metody diagnostyczne, mimo chęci naukowców doprowadzenia diagnostyki do jak najwyższej czułości i swoistości, wymagają kontroli kontrolnej i indywidualnego podejścia.

Cechą infekcji syfilitycznej jest zjawisko serooporności, które nie zostało wyjaśnione naukowo. Diagnozę stawia się po pełnym zbadaniu pacjenta metodami epidemiologicznymi, klinicznymi, laboratoryjnymi.

Na tle rozwoju ekonomicznego i technicznego medycyny następuje również postęp w opracowywaniu nowych kryteriów diagnozowania kiły. Wszystko to pozwoli Ci szybko, skutecznie i dokładnie leczyć pacjentów.

Pośrednie metody diagnozowania kiły.

Do diagnozy kiły stosuje się wiele metod badawczych, różniących się techniką i celem. Metody bezpośrednie mają na celu wykrycie patogenu w badanym materiale za pomocą mikroskopii (mikroskopia ciemnego pola itp.) lub PCR.

Oprócz metod bezpośredniego wykrywania bladego treponema (T. pallidum), podczas badania na kiłę, pośrednio ( serologiczny) metody badawcze wykrywające przeciwciała przeciwko czynnikowi wywołującemu kiłę w surowicy krwi i płynie mózgowo-rdzeniowym. Pośrednie metody diagnozowania kiły obejmują testy serologiczne ELISA, RPHA, CSR, RIF i RIF-abs, RIBT, PCR, metoda ekspresowa, immunoblot i inne.

Serologiczne metody diagnozowania chorób zakaźnych.

Serologiczne kryteria diagnostyczne w oparciu o specyficzne reakcje antygen-przeciwciało. Antygeny (składniki ścian komórkowych, wici, otoczki, DNA i toksyny) drobnoustrojów, które wymagają oznaczenia, reagują z przeciwciałami zawartymi w surowicach. Wiązanie zachodzi między antygenami i odpowiadającymi im przeciwciałami, co jest podstawą serologicznych metod diagnostycznych. Testy serologiczne służą do wykrywania nieznanego antygenu (którego źródłem jest bakteria, wirus, toksyna itp.) przy użyciu znanego przeciwciała lub do wykrywania przeciwciała w surowicy przy użyciu znanego antygenu.

Reakcje serologiczne są klasyfikowane w zależności od stanu antygenu i charakterystyki środowiska, w którym oddziałują antygen i przeciwciało, a także sposobu przeprowadzenia.

Do przeprowadzania reakcji serologicznych stosuje się wiele metod laboratoryjnych, takich jak aglutynacja, precypitacja, wiązanie dopełniacza, immunofluorescencja, test immunoenzymatyczny i radioimmunologiczny i inne. Reakcje te pozwalają na skuteczną wstępną identyfikację drobnoustrojów.

Surowice potrzebne do wywołania reakcji serologicznych są pozyskiwane eksperymentalnie, w szczególności są produkowane przez instytuty szczepionek i surowic oraz oferowane jako część komercyjnych zestawów diagnostycznych.

Metody serologiczne są ważnym narzędziem w diagnostyce i leczeniu choroba zakaźna ludzie i zwierzęta, ponieważ z ich pomocą można nie tylko zidentyfikować czynnik sprawczy choroby, ale także wykryć specyficzne przeciwciała przeciwko odpowiednim patogenom we krwi pacjentów i pacjentów wyzdrowiałych. Metody serologiczne w czas teraźniejszy są najskuteczniejszymi metodami diagnostycznymi, gdy izolacja patogenu jest niemożliwa lub trudna, a stosunkowo rzadko dają wyniki fałszywie dodatnie i fałszywie ujemne.

Stosowanie metod serologicznych w diagnostyce kiły

Podstawą serologicznych metod laboratoryjnych do diagnozowania kiły jest zdolność organizmu do odpowiedzi immunologicznej na pojawienie się patogenu. Za pomocą reakcji serologicznych w surowicy (osoczu) krwi (lub płynie mózgowo-rdzeniowym) wykrywa się ślady odpowiedzi immunologicznej na infekcję, a mianowicie przeciwciała przeciwko bladym antygenom treponema lub same antygeny.

W celu ustalenia specyfiki istniejącego objawy kliniczne(czyli że są następstwem kiły) i w przyszłości, aby kontrolować dynamikę procesu patologicznego, zaproponowano duża liczba serologiczne metody badawcze. Te same metody są również szeroko stosowane do badań przesiewowych populacji.

Zgodnie z aktualnymi wytycznymi krajowymi i wytycznymi klinicznymi, w wielu krajach na całym świecie zaawansowane metody serologiczne są wykorzystywane w badaniach populacyjnych w celu identyfikacji pacjentów z kiłą i postawienia diagnozy klinicznej. Są używane tak, jakby objawy kliniczne choroby u pacjentów oraz w okresach utajonych.

Ustalenie reakcji serologicznych jest jedną z najbardziej niezawodnych metod diagnozowania kiły. Standaryzowane testy serologiczne o regulowanej metodzie nastawiania nazywane są testami serologicznymi na kiłę. Biorąc pod uwagę, że prawie wszystkie reakcje serologiczne na kiłę w określonych warunkach mogą być fałszywie dodatnie lub fałszywie ujemne, należy je umieścić w kompleksie i, jeśli to konieczne, w dynamice.

Testy serologiczne, które służą do oznaczania przeciwciał w surowicy krwi pacjenta, różnią się od siebie czułością, specyficznością, złożonością ustawienia i kosztem. Oprócz metod klasycznych do skutecznego serodiagnostyki kiły stosuje się testy i technologie immunologiczne, które w XXI wieku nabrały nowego rozmachu.

Przeciwciała są wykrywane różnymi metodami immunochemicznymi (serologicznymi), w tym reakcjami sedymentacyjnymi, testem immunoenzymatycznym, immunochemiluminescencją, testami immunochromatograficznymi, immunoblottingiem liniowym, fluorometrią przepływową, technologią immunochipową i innymi.

Serodiagnostyka (badanie metodami serologicznymi) służy do:

• potwierdzenie diagnozy klinicznej kiły,
• diagnoza kiły utajonej,
• monitorowanie skuteczności leczenia, jako jedno z kryteriów wyleczenia pacjentów z kiłą,
• profilaktyka kiły (badanie przesiewowe niektórych grup ludności w celu identyfikacji patologii).

Najważniejsze właściwości wymagane przez testy serologiczne – czułość, specyficzność, powtarzalność

Decydującym kryterium wyboru laboratoryjnej metody diagnostycznej jest jej skuteczność – czułość, specyficzność i powtarzalność.

Wrażliwość to odsetek pozytywnych wyników u pacjentów. Czułość metody jest określana przez procent pozytywnych wyników badania próbek, o których wiadomo, że zawierają specyficzne markery patogenu (np. antygeny patogenu lub przeciwciała przeciwko nim).

Specyficzność- odsetek negatywnych wyników badań u zdrowych pacjentów. O specyficzności metody decyduje odsetek negatywnych wyników badania próbek, które oczywiście nie zawierają specyficznych markerów patogenu. Zatem im wyższa czułość i swoistość, tym bardziej wiarygodne i bardziej niezawodna metoda Badania.

Ważne kryteria diagnostyczne obejmują również odtwarzalność wyniki z powtórnych badań tych samych próbek. Należy zauważyć, że pomimo znacznych postępów w zaawansowanej technologii nie istnieją metody zapewniające 100% (bezwzględną) czułość i swoistość we wszystkich badanych testach biologicznych.

Obecnie systemy testowe, zestawy i składniki, które mają czułość i specyficzność mniejszą niż 95% podczas przygotowywania reakcji, są oficjalnie zarejestrowane w Rosji. W ten sposób zawsze istnieje możliwość uzyskania nieodpowiedniego wyniku.

Klasyfikacja testów według rodzaju użytego antygenu. Testy krętkowe i niekrętkowe na kiłę

We współczesnej wenerologii do celów diagnostycznych wykorzystuje się kilkanaście wariantów serologicznych reakcji na kiłę, które można podzielić na różne kategorie według różnych kryteriów. Klasyfikacja prowadzona jest zgodnie z metodologią badań, zakresem, szybkością, niskim kosztem, wymaganiami dotyczącymi sprzętu laboratoryjnego itp.

Reakcje krętkowe są teoretycznie bardziej szczegółowe, ale dają również wyniki fałszywie dodatnie. Ponadto nie pozwalają odróżnić kiły nieleczonej od wyleczonej. Wyniki reakcji krętkowych będą pozytywne w obu przypadkach. Reakcje niekrętkowe rozróżniają infekcje nieleczone, niedawno przebyte i wyleczone.

Podczas badania zaleca się przeprowadzenie zarówno reakcji krętkowych, jak i niekrętkowych. Aby ustalić i potwierdzić diagnozę kiły, wymagane są pozytywne wyniki dla obu rodzajów testów - krętkowych i niekrętkowych. Dlatego testy bez krętków są stosowane w połączeniu z testami krętkowymi i są przeprowadzane przed, w trakcie i po zakończeniu leczenia w określonych odstępach czasu.

1. Testy bez krętków

Najsłynniejsze z testów bezkręgowych z wizualną interpretacją wyników to

• RW - reakcja Wassermanna z antygenami lipidowymi (reakcja dopełnienia wiązania z antygenem kardiolipiny, RSKk)
• reakcja Kanna (obecnie nie używana),
• reakcja cytocholiczna Zaksa-Vitebskiego (obecnie nie stosowana),
• mikroreakcja precypitacji z osoczem lub surowicą inaktywowaną (MRP lub RMP),
• RPR (Rapid Plasma Reagin test),
• ZAUFANIE (test na niepodgrzewaną czerwień toluidyny).

Wśród testów niekrętkowych wyróżniamy 2 testy z mikroskopowym odczytem wyników reakcji:

1. VDRL - (Laboratorium Badań Chorób Wenerycznych);

2. USR - test do oznaczania aktywnych reagin osocza (Unheated Serum Reagins).

Reaktywność w testach niekrętkowych zwykle wskazuje na uszkodzenie tkanki i nie zawsze jest specyficzna dla kiły. Łatwość wdrożenia i niski koszt pozwalają na wykorzystanie ich jako reakcji przesiewowych w ustaleniu wstępnej diagnozy kiły.

2. Testy krętkowe

Testy krętkowe wykorzystują specyficzne antygeny krętkowe. Testy te są wymagane do potwierdzenia diagnozy (RPHA, RIT, RIF i ELISA). Są bardziej złożone i droższe niż testy z grupy 1, ale także bardziej specyficzne i czułe. Wykrywanie przeciwciał w płynie mózgowo-rdzeniowym odbywa się również za pomocą testów krętkowych.

Tradycyjne badania krętkowe potwierdzające rozpoznanie kiły wymagają drogiego sprzętu laboratoryjnego i doświadczonego personelu, dlatego rzadko są wykonywane poza specjalistycznymi laboratoriami. Jednak można je teraz zastąpić prostymi i szybkimi testami krętkowymi, które można przeprowadzić w terenie i użyć pełnej krwi. Przeprowadzanie tych reakcji nie wymaga długotrwałego szkolenia, specjalnych warunków przechowywania odczynników i sprzętu.

Porównywalna taniość, wygoda i praktyczność krętkowych reakcji ekspresowych zwracają na nie uwagę nie tylko jako metody potwierdzania diagnozy. Reakcje te można wykorzystać do badań przesiewowych w kierunku kiły w ramach podstawowej opieki zdrowotnej. opieka medyczna(mogą być wykonywane w terenie, w tej samej placówce służby zdrowia) lub w miejscach, gdzie laboratoria nie są dostępne. Ponieważ jednak przeciwciała przeciwko T. pallidum są określane przez wiele lat, niezależnie od tego, czy pacjent był leczony, czy nie, szybkie reakcje krętkowe nie mogą być wykorzystywane do oceny skuteczności leczenia i diagnostyki różnicowej nieleczonej i wyleczonej kiły.

Klasyfikacja metod serologicznych do diagnozowania kiły według rodzaju wykrytych przeciwciał

We współczesnej dermatowenerologii do diagnozy stosuje się różne reakcje serologiczne na kiłę. Niektóre metody, które były istotne dziesięć lat temu, nie są już używane ze względu na złożoność lub brak precyzji. W zależności od wykrytych przeciwciał metody serologicznej diagnostyki kiły dzielą się na trzy grupy:

I. Reakcje lipidowe (reagin) - przeciwciała przeciwko antygenom lipidowym (reaginom) określa się:

1) flokulacja: mikroreakcja na szkle z antygenami lipidowymi - ekspresowa metoda diagnostyczna (mikroreakcje strącania - MRP), VDRL, CMF (test mikroflokulacji kardiolipiny), RPR itp .;

2) reakcja wiązania dopełniacza (RSK) z antygenami lipidowymi: reakcja Wassermana (RV), jakościowa i ilościowa metoda wiązania, termostatyczna i na zimno (reakcja Colmera);

3) reakcje sedymentacyjne, które nie są obecnie stosowane: reakcja strącania Cahna, reakcja cytocholiczna Sachsa-Vitebsky'ego itp.;

II. Reakcje krętków grupowych - określa się przeciwciała przeciwko antygenom krętków grupowych (które są częścią komórki drobnoustrojów zarówno patogennych, jak i saprofitycznych krętków):

1) CSC z antygenem białkowym Reitera;

2) reakcja immunofluorescencyjna (RIF);

3) reakcja immunoadhezyjna (RIP).

III. Specyficzne gatunkowo białkowe reakcje krętkowe - oznacza się przeciwciała przeciwko specyficznym gatunkowym antygenom Treponema pallidum:

1) reakcja unieruchomienia bladych krętków (RIT);

2) reakcja immunofluorescencyjna RIF-abs i jej warianty (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS itp.);

3) reakcja pośredniej hemaglutynacji bladych krętków (TPHA) i jej modyfikacja TPPA.

4) test immunoenzymatyczny (ELISA);

5) immunoblotting.

Praktyczne zastosowanie testów serologicznych na kiłę

Do różnych celów praktycznych stosuje się różne testy serologiczne.

Za granicą, w masowych badaniach populacji i, jeśli to konieczne, awaryjnym wykrywaniu kiły, stosuje się niekrętkowe reakcje przesiewowe (VDRL, RPR itp.). Diagnoza wymaga potwierdzenia testami krętkowymi FTA-ABS, TPHA lub TPPA. Obecnie zaleca się stosowanie ELISA jako zamiennika VDRL w testach przesiewowych. Wynika to z faktu, że test ELISA wyróżnia czułość, swoistość, możliwość automatyzacji badań, a także rozwój zestawów testów diagnostycznych. Ponadto uzasadniono odwrotny schemat kolejności badań na kiłę, gdy najpierw stosuje się testy krętkowe.

W celu monitorowania skuteczności terapii i oceny aktywności infekcji zaleca się ilościowe VDRL. Test ELISA na przeciwciała przeciwkrętkowe IgM jest stosowany jako test potwierdzający/dodatkowy.

W praktyce domowej stosuje się kompleks reakcji serologicznych (CSR), w tym reakcję mikroprecypitacji (RMP) z antygenem kardiolipiny i CSC z antygenami kardiolipiny i krętków. Ostatnio w CSR zaleca się zastąpienie RSK ELISA lub RPHA. Stosowane są również RIF (i jego modyfikacje - RIF-Abs i inne), RIBT.

RIBT stosuje się jako reakcję badawczą w przypadku rozbieżności reakcji krętkowych.

Podejścia do laboratoryjnej diagnostyki serologicznej kiły w Federacji Rosyjskiej

Wprowadzenie ujednoliconych metod klinicznych badań laboratoryjnych do praktyki w ZSRR i Federacji Rosyjskiej umożliwiło wprowadzenie bardziej zaawansowanych metod diagnostycznych, usprawnienie pracy klinicznych laboratoriów diagnostycznych, zwiększenie wydajności pracy, ograniczenie powielania testów laboratoryjnych i stało się podstawą do opracowania racjonalnych form gotowych zestawów odczynników.

W 1985 roku w ZSRR, w celu poprawy diagnostyki kiły, z kompleksu diagnostycznego wyłączono niekrętkową reakcję CSC z niespecyficznym antygenem (Wassermanna) oraz reakcje osadowe (cytocholowe i Cana) jako mniej czułe i nie dające dodatkowych Informacja.

Zamiast tego w ramach kompleksu testów serologicznych na kiłę (CSR) przewidziano zastosowanie reakcji wiązania dopełniacza z antygenami krętkowymi i kardiolipinowymi (RSKt) oraz reakcji mikroprecypitacji z antygenem kardiolipinowym (RMP). Wyższa czułość i zawartość informacyjna tego kompleksu reakcji zapewniła wykrycie nie tylko reagin, ale także przeciwciał przeciwkrętkowych.

1985

1. RMP z antygenem kardiolipiny z osoczem krwi i inaktywowaną surowicą krwi. Test doboru w przypadku zastosowania izolowanego.

2. CSC z antygenami krętkowymi i kardiolipidowymi; jakościowe i ilościowe metody wiązania, termostatyczne i na zimno;

3. Reakcja unieruchamiania Treponema pallidum (RIT); metody wiązania probówkowe i melanżowe;

4. Reakcja immunofluorescencyjna (RIF) w następujących modyfikacjach: RIF z absorpcją (RIF-abs) z surowicą krwi i krwią włośniczkową, RIF-200, RIF z pełnym płynem mózgowo-rdzeniowym (RIF-c); jakościowe i ilościowe metody ustalania. Diagnoza utajonych i późnych postaci kiły, uznanie decydentów (wyniki fałszywie dodatnie)

5. Kompleks klasycznych reakcji serologicznych (CSR): RSC (reakcja Wassermana) z antygenami kardiolipiny i krętków + RMP. Badanie profilaktyczne populacji pod kątem kiły, diagnostyka wszystkich postaci kiły, monitorowanie skuteczności leczenia, badanie osób będących kontaktami na kiłę.

W 2001 r. Ministerstwo Zdrowia Federacji Rosyjskiej zatwierdziło nowy dokument regulacyjny regulujący procedurę przeprowadzania badań diagnostycznych - Rozporządzenie Ministerstwa Zdrowia Federacji Rosyjskiej nr 87 z dnia 26 marca 2001 r. „W sprawie poprawy diagnostyki serologicznej kiły ”.

W celu usprawnienia diagnostyki laboratoryjnej kiły, poprawy jakości pracy i zapobieżenia dalszemu rozprzestrzenianiu się zachorowalności na kiłę zaleca się zastąpienie RSK w zespole seroreakcji (CSR) w diagnostyce kiły testami ELISA i TPHA jako badania przesiewowe i potwierdzające, ponieważ te systemy testowe są bardzo czułe, specyficzne i powtarzalne.

Zarządzenie nr 87 z dnia 26 marca 2001 r. „W sprawie poprawy serologicznej diagnostyki kiły” przewiduje zastosowanie następujących metod diagnozowania kiły sero- i mózgowo-rdzeniowej w Rosji:

1. RMP i obce analogi (VDRL, RPR i podobne mikroreakcje) jako testy przesiewowe przy badaniu populacji pod kątem kiły. RMP wykonuje się z osoczem lub inaktywowaną surowicą krwi.
2. Test immunoenzymatyczny (ELISA). Antygen z hodowanego lub patogennego treponema pallidum. Reakcje diagnostyczne, w tym do diagnostyki alkoholowej. Ze względu na łatwość ustawienia i dostępność komercyjnych systemów testowych mogą być stosowane jako testy przesiewowe.
3. Reakcja biernej hemaglutynacji (RPHA). Antygen z hodowanego lub patogennego treponema pallidum. Selekcja i reakcje diagnostyczne.
4. Jakościowe i ilościowe warianty RIF (RIF-abs, RIF-c, RIF z krwią włośniczkową z palca). Antygen - patogenny blady treponema szczepu Nichols.
5. Kompleks reakcji serologicznych (CSR) na kiłę, składający się z reakcji wiązania dopełniacza (CFR) z antygenami krętkowymi i kardiolipinowymi oraz RMP. Możliwe jest zastąpienie reakcji wiązania dopełniacza testem ELISA lub RPHA również w połączeniu z RMP. CSR odnosi się do testów diagnostycznych.
6. Reakcja unieruchamiania bladego treponema (RIBT), w której jako antygen stosuje się patogenny treponema pallidum szczepu Nichols. RIBT to diagnostyczne testy potwierdzające.

Dlatego też kolejność badań pacjentów w kierunku kiły w placówkach służby zdrowia zaleca się zaplanować w następujący sposób:

1. W trakcie badania wstępnego przeprowadzana jest reakcja selekcyjna (przesiewowa) mikroprecypitacji (RMP) lub jej modyfikacji (RPR, TRUST, VDRL) w wersji ilościowej i jakościowej, a w przypadku wyniku pozytywnego dowolny specyficzny potwierdzający test krętkowy ( RPHA, ELISA, CSR, RIF, RIT);

2. Po zakończeniu terapii zakłada się RMP lub jego modyfikację, a dynamikę procesu zakaźnego i skuteczność terapii ocenia się na podstawie spadku miana. Potwierdzeniem skuteczności terapii jest obniżenie miana o 4 lub więcej razy w ciągu 1 roku.

Odbiór po wcześniejszym umówieniu! Sobota niedziela.

Testy Reagin są wykorzystywane do masowych badań przesiewowych pacjentów pod kątem kiły. Są one zwykle przeprowadzane w ramach badań profilaktycznych. Takie badania są dostępne w każdej placówce medycznej i przeprowadzane są szybko. Odpowiedź jest zwykle gotowa po 30-40 minutach.

Pozytywny wynik w reakcjach odczynowych nie jest kryterium do postawienia diagnozy. Potrzebne są dodatkowe badania specyficzne dla gatunku.

Najpopularniejszą metodą przesiewową jest reakcja Wassermana. Wykorzystuje antygeny kardiolipiny i krętków. Jeśli w surowicy krwi nie ma reagin, nastąpi hemoliza erytrocytów barana, które są dodawane jako wskaźnik.

W obecności reagin wytrącają się całe erytrocyty, w którym to przypadku reakcję uważa się za pozytywną.

Reaginic w następujących przypadkach:

• inne choroby, których czynniki sprawcze są podobne w strukturze antygenowej do krętka pallidum
• ciąża
• choroby onkologiczne
• przyjmowanie salicylanów
• zawał mięśnia sercowego
• błędy techniczne w analizie

Po pozytywnym wyniku reakcji reaginicznej wykonuje się specyficzne testy serologiczne. Są również przepisywane, jeśli wynik negatywny jest wątpliwy.

Antygeny krętkowe są wykorzystywane w takich testach jak RIF, RIT, ELISA, TPHA, reakcja hemadsorpcji w fazie stałej. Reakcje te opierają się na tworzeniu kompleksów antygen-przeciwciało i różnią się sposobem ich oznaczania. Najczęściej stosowaną reakcją jest immunofluorescencja.

Lek jest leczony luminescencyjną surowicą, która pozwala określić kompleksy immunologiczne pod mikroskopem fluorescencyjnym.

Jednym z najczulszych testów serologicznych do diagnozowania kiły jest TPHA. Metoda ma wysoką dokładność. Jest często używany do weryfikacji diagnozy w czasie ciąży, gdy inne testy mogą dać fałszywie dodatni wynik.

Cechy serodiagnostyki

Do diagnostyka serologiczna kiły w różnych jej okresach pobrać krew z żyły. Zaleca się przeprowadzenie analizy na pusty żołądek, co zmniejsza liczbę wyników fałszywie dodatnich. Probówka musi być sterylna. Podczas przeprowadzania ekspresowych testów w niektórych przypadkach krew pobierana jest z palca.

W przypadku podejrzenia pobiera się płyn mózgowo-rdzeniowy do serodiagnozy. Do jego analizy stosuje się te same metody, co w badaniu krwi.

Aby zdiagnozować kiłę, przejdź pełne badanie w naszej klinice.

Rosja poprawia się z roku na rok. Jednak każdego roku podczas testów wykrywane są tysiące chorych. Badania w kierunku tej choroby przeprowadzane są zarówno przed ciążą, jak i przed planowaną hospitalizacją. Ponadto co roku przedstawiciele wielu zawodów poddawani są badaniom lekarskim, w których m.in. trzeba wykonać test na kiłę. I oczywiście bez tej analizy kariera urzędnika państwowego, lekarza i po prostu wakatów, takich jak nauczyciele, kucharze, pedagodzy, będzie dla człowieka zamknięta.

Współczesna medycyna zna wiele sposobów wykrywania bladego treponema, który jest przyczyną choroby, w ludzkiej krwi. Metody te są podzielone na kilka dużych grup:

1. W pierwszej grupie badań - testy, w których poszukuje się obecności krętków w biomateriale. W tym celu pobiera się materiał do badań z wrzodów lub chorych narządów.
2. Druga, serologiczna grupa metod pozwala zidentyfikować pośrednie ślady obecności krętków w organizmie. Odnosi się to do przeciwciał, których aktywna produkcja organizm reaguje na infekcję.

Opinia eksperta

Artem Sergeevich Rakov, wenerolog, ponad 10 lat doświadczenia

Testy bezpośrednie sprawdzają się znakomicie przy pierwszych objawach choroby, testy serologiczne należy przeprowadzić około tydzień po pojawieniu się pierwszego wrzodu. Innymi słowy, jeśli podejrzewa się infekcję, najlepiej jest skorzystać z testów typu bezpośredniego.

Diagnostyka laboratoryjna kiły

Badanie laboratoryjne polega na tym, że skrawki DNA treponema są namnażane w probówce w warunkach powtarzających się cykli temperaturowych. Na każdym etapie liczba sztucznie odtworzonych kopii patogenu podwaja się. Eksperci nazywają to amplifikacją fragmentów DNA. Istnieje rozdział cząsteczek według ich masy, co umożliwia identyfikację krętków.

PCR

Technika badawcza PCR umożliwi znalezienie jednej cząsteczki kiły, nawet jeśli jest to jedna na tysiące innych cząsteczek. Materiał genetyczny do badania PCR można pobrać bezpośrednio z wrzodów syfilitycznych, płynu mózgowo-rdzeniowego, tkanki łożyska, krwi z palca, a nawet płynu nasiennego. Najczęściej lekarze używają płynu tkankowego z wrzodów.

Wydajność badania PCR sięga 98,6%. Przy prawidłowo przygotowanym badaniu praktycznie wykluczone są wyniki fałszywie dodatnie tą metodą. Również lekarze uciekają się do tej techniki, jeśli zakładają niewielką zawartość krętków w badanym materiale. To właśnie ten czynnik decyduje o konieczności przeprowadzenia analizy w przypadku podejrzenia kiły wrodzonej.

Mikroskopia ciemnego pola

Badanie mikroskopowe ciemnego pola jest uważane za jedną z najtańszych, ale jednocześnie skutecznych metod wykrywania obecności bladego treponemy, a także:

1. Do badania stosuje się specjalny roztwór soli fizjologicznej, w którym umieszcza się lek. Następnie na szklaną prowadnicę kierowana jest wąska wiązka jasnego światła. Z powodu tzw. zjawiska Tyndalla patogeny zaczynają świecić w ciemnym polu roztworu.
2. Najlepszym materiałem do tego typu badań są również próbki płynu tkankowego uzyskane z owrzodzeń narządów płciowych zlokalizowanych odpowiednio na genitaliach. To jeden z najszybszych testów, ponieważ wyniki testu będą gotowe za kilka godzin.

Należy jednak pamiętać, że metoda ciemnego pola nadaje się do wykrywania wciąż żywych krętków. W związku z tym nie ma sensu poddawać się takim badaniom po rozpoczęciu leczenia zewnętrznego, ponieważ wykrycie żywych próbek patogenu będzie prawie niemożliwe.

Test RIT

Test RIT polega na przeszczepieniu materiału od osoby zakażonej do królików laboratoryjnych. Wrażliwość tych zwierząt na zakażenie kiłą sięga 100%, więc jeśli w biomateriale pacjenta znalazły się blade krętkowce, to one również zaatakują królika.

Jednak dziś ta metoda praktycznie nie jest stosowana ze względu na wysokie koszty i koszty czasu. Dzięki dostępnym szybszym testom lekarze wolą nie czekać, aż zwierzę wykaże objawy choroby. Niemniej jednak metoda ta jest nadal wykorzystywana w pracach badawczych, a także w celu potwierdzenia lub obalenia trafności innych rodzajów analiz.

Serodiagnostyka kiły

Metody serologiczne pozwalają wyizolować w organizmie nie czynnik sprawczy kiły, ale przeciwciała, za pomocą których organizm próbuje pokonać chorobę. Naukowcy dzielą metody serologiczne na dwie grupy, które zostaną omówione poniżej.

Testy niekrętkowe obejmują:

• RMP - reakcja mikroprecypitacji z osoczem i inaktywowaną surowicą;
• RPR - szybki test reagin w osoczu.

Najczęściej specjaliści uciekają się do testów bez krętków, jeśli konieczne jest masowe badanie przesiewowe w kierunku kiły. Wynika to z faktu, że takie testy są dość tanie, nie wymagają specjalnego sprzętu laboratoryjnego i charakteryzują się stosunkowo dużą dokładnością.

Są również nie mniej skuteczne w ocenie trwającego leczenia. Za ich pomocą możesz szybko monitorować poziom przeciwciał przeciwko kile we krwi.

Testy krętkowe obejmują:

1. ELISA - test immunoenzymatyczny;
2. RPHA - pasywna reakcja hemaglutynacji;
3. RIF - reakcja immunofluorescencyjna;
4. immunoblotting;
5. IHL - immunochemiluminescencja;
6. RIBT (RIT) - reakcja unieruchomienia bladych krętków.

Testy krętkowe są przepisywane w przypadkach, w których należy upewnić się, że wynik testu bez krętków nie był fałszywie dodatni. Stosuje się je również w przypadkach, gdy wynik badania przesiewowego za pomocą testu krętkowego odbiega od wyniku testu bezkrętkowego.

Ponadto testy krętkowe doskonale nadają się do zastosowania, jeśli choroba nie ma jeszcze widocznych objawów, ale istnieją podejrzenia lekarza na podstawie historii i wyników badań. Niestety testy bez krętków w tym okresie są nieskuteczne i często dają wyniki fałszywie ujemne.

Ekspresowa diagnostyka kiły

Ten rodzaj diagnozy jest najczęściej stosowany w przypadku niektórych grup pacjentów:

• Podobny test powinna wykonać każda kobieta w ciąży, aby chronić siebie i swoje nienarodzone dziecko.
• Ponadto z tej metody mogą skorzystać osoby, które mieszkają w tym samym pokoju z pacjentami z syfilityzmem, nie stosują antykoncepcji i często zmieniają partnerów seksualnych. Nadaje się również dla osób, które nie mogą przejść pełnego badania w szpitalu lub klinice.

Zasadę zastosowania szybkiego testu na kiłę można porównać do zastosowania testu ciążowego, ale trzeba do niego pobrać kilka kropli krwi.

Test najlepiej wykonać rano na czczo. Na dwa dni przed proponowanym badaniem lekarze zalecają niepicie alkoholu, a około godzinę przed zabiegiem rezygnację z papierosów.

Sama analiza zajmuje trochę czasu:

1. Palec należy zdezynfekować gazikiem nasączonym alkoholem, po czym kilka kropel krwi należy wycisnąć z nacięcia na urządzenie testowe.
2. Następnie dodaj tam dostarczony odczynnik.
3. Średnio musisz poczekać 15 minut, zanim pojawi się wynik. Eksperci ostrzegają, że jeśli wynik pojawi się po pół godzinie, może być fałszywy.

Jaka jest Twoim zdaniem najdokładniejsza metoda diagnostyczna?

SerodiagnostykaEkspresowa diagnostyka

Należy pamiętać, że jeśli dana osoba została niedawno zarażona, dokładność i wiarygodność takich testów nie przekracza 80%. Zdecydowanie nie warto więc utożsamiać tego z pełnoprawnym egzaminem przez specjalistę.

Gdzie mogę zrobić test na kiłę?

Możesz zamówić badanie biomateriału na kiłę:

• w dowolnej klinice;

• prywatna klinika;

• laboratoria.

Zaletą instytucji budżetowych jest to, że tam usługa ta jest bezpłatna. Istotną wadą jest czas oczekiwania na analizę, zła logistyka niektórych klinik państwowych oraz fakt, że w przypadku wykrycia kiły trudno będzie ten fakt ukryć.

Prywatne kliniki i laboratoria zgadzają się na współpracę z pacjentami na zasadzie poufności. Jest to odpowiednie dla tych, którzy nie chcieliby, aby ich choroba stała się znana. Należy jednak pamiętać, że formularz z wynikiem, na którym nie pojawia się nazwisko pacjenta, nie podlega akceptacji w żadnej organizacji.

Oczywiście będziesz musiał zapłacić za analizę w prywatnej instytucji, ale wynik można poznać w ciągu 2-3 dni. Co więcej, wiele klinik oferuje ekspresowe badania bez żadnych problemów i raportuje wyniki w ciągu kilku godzin.

Ile kosztuje wykonanie testu na kiłę?

Cena do analizy zależy od jej rodzaju. Badanie przesiewowe będzie kosztować pacjenta 300-400 rubli. Analiza określająca obecność DNA w określonym typie biomateriału będzie kosztować w regionie 500 rubli.

Oczywiście ceny różnią się w zależności od laboratoriów, użytych materiałów i ostatecznej dokładności samego testu. W tym przypadku często sprawdza się zasada, zgodnie z którą im droższy test, tym jest dokładniejszy.

Kiła to podstępna choroba, która powoli, ale pewnie nie tylko niszczy narządy wewnętrzne, ale także wpływa na cały system nerwowy osoba. Na szczęście choroba ta rozwija się w powolnym tempie, co ujawniła nauka skuteczne metody walcząc z nim w czasach, gdy wynalazła penicylinę, na którą krętkowce są nadal podatne. Najważniejsze jest więc, aby na czas przejść badanie jakościowe, a następnie skonsultować się z doświadczonym lekarzem.

Możesz również obejrzeć film w tym artykule, w którym lekarz opowie Ci o analizie RIF na kiłę.

Kiła jest wieloaspektowa. Infekcja, dostając się do organizmu, pozostawia ślady nie tylko na skórze i genitaliach, ale także niszczy układ nerwowy, układ mięśniowo-szkieletowy, płuca, upośledza słuch i wzrok. Pomimo szerokiej gamy objawów i wariantów ich kombinacji, lekarze nauczyli się rozpoznawać chorobę i dokładnie wskazywać etap jej rozwoju.

Społeczeństwo chce chronić się przed zakażeniem Treponema pallidum. W związku z tym przewidziano szereg ekspresowych testów do wczesnej diagnozy kiły lub identyfikacji nosicieli zakażenia. Zasadą było pobranie krwi do diagnostyki laboratoryjnej:

• w przypadku ciąży;
• przed operacją;
• od dawców przed oddaniem krwi lub narządów do przeszczepu;
• pracownicy medyczni, nauczyciele, edukatorzy, pracownicy gastronomii itp.;
• personel wojskowy;
• na więźniów.

Badanie laboratoryjne i badanie kliniczne w kierunku kiły zostaną przeprowadzone dla:

• pacjenci z objawami chorób przenoszonych drogą płciową;
• partnerzy seksualni i inni członkowie rodziny osoby, u której zdiagnozowano kiłę;
• dzieci urodzone z chorej matki;
• każdy, u kogo zdiagnozowano inną chorobę przenoszoną drogą płciową;
• badanie skuteczności metody terapeutycznej w trakcie leczenia;
• każdy, kto uzyskał wynik pozytywny.

Procedura wykrywania infekcji na wizycie wenerologa

Z rozmowy z pacjentem lekarz dowiaduje się:

• czy partner ma potwierdzoną diagnozę kiły;
• czy wcześniej występowały wysypki na genitaliach;
• Czy węzły chłonne są w stanie zapalnym?
• czy był seks bez zabezpieczenia 3-4 tygodnie temu.

Podczas badania klinicznego skóry, narządów płciowych, odbytu, błon śluzowych specjalista stwierdza podobieństwo wysypek i innych zmian skórnych do tych charakterystycznych dla kiły. Obwodowe węzły chłonne są dokładnie obmacywane w celu oceny stopnia ich powiększenia.

W przypadku syfilidów (twardy wrzód, różyczka, grudki, ziarniniaki) lekarz zleca badanie histomorfologiczne. Laboratorium opisuje wygląd zewnętrzny i studiować treści kształcenia. Na podstawie wyników oceniany jest stopień zaawansowania choroby.

Decydujący wkład w rozpoznanie kiły ma laboratoryjna metoda identyfikacji patogenu lub śladów odpowiedzi immunologicznej na infekcję.

Rozpoznanie ustala się na podstawie kombinacji danych uzyskanych po badaniu klinicznym i badaniach laboratoryjnych. W wyjątkowych przypadkach, gdy niemożliwe jest przeprowadzenie badań, leczenie zleca się na podstawie badania.

Diagnoza powikłań

Kiła wtórna i trzeciorzędowa może powodować powikłania zwane specyficznym zapaleniem trzewnym. Wszystkie narządy i układy mogą być objęte procesem, ale najczęściej wenerolodzy obserwują zmiany:

• wątroba;
• system nerwowy;
• kości;
• kiery.

Kiła jest szczególnie niebezpieczna dla kobiet w ciąży. Oprócz skomplikowanej ciąży, zakażenia wewnątrzmacicznego lub pionowego (w kanale rodnym) płodu, urodzenie martwego płodu nie jest wykluczone.

Ważne jest, aby na czas zdiagnozować nie tylko infekcję, ale także choroby wtórne. W tym celu oprócz badań specyficznych oraz badań ogólnych moczu i krwi wykonuje się badania dodatkowe (tab.).

Analizy laboratoryjne materiałów biologicznych

Diagnostyka laboratoryjna kiły zaczęła się rozwijać od 1905 r., Kiedy odkryto czynnik sprawczy choroby, blady treponema. Wcześniej króliki zarażano zawartością syfilidów, które są w 100% podatne na infekcję. Już w 1906 Wasserman opracował pierwszy test serologiczny na kiłę (RW). W 1949 roku medycyna zaproponowała bardziej szczegółowy test unieruchamiania treponema pallidum (TPT), ale RW nie został wyparty z laboratoriów do dziś.

Pierwsze analizy zastępowane są nowoczesnymi metodami diagnostycznymi. Różnią się techniką i przeznaczeniem. Na liście aktualnych testów:

• mikroskopia ciemnego pola - obejmuje badanie rozmazu lub skrobania w celu wykrycia krętków w badanym podłożu (w życiu codziennym badanie to jest czasami nazywane „rozmazem na kiłę”);
• metody biologii molekularnej do wykrywania specyficznego DNA (reakcja łańcuchowa polimerazy, sondowanie DNA);
• diagnostyka serologiczna kiły w surowicy krwi lub płynie mózgowo-rdzeniowym.

Mikroskopia ciemnego pola

Ze zmian chorobowych pobiera się próbki do badania mikroskopowego pod kątem bladego krętków. Przedmiotem badań są:

• zawartość kiły;
• płyn tkankowy;
• trunek;
• płyn owodniowy;
• tkanka pępowinowa.

Treponema otrzymała charakterystyczny „blady” ze względu na swoją odporność na działanie większości barwników. Żywy drobnoustrój jest wyraźnie widoczny w ciemnym polu przy specjalnym oświetleniu. Asystent laboratoryjny zwraca uwagę na: cechy morfologiczne bakterie i obserwuje charakter ich ruchu.

Do badania histomorfologicznego próbki barwi się srebrem (według Morozowa) lub według Romanowskiego-Giemsy.

Metody bezpośredniej mikroskopii służą do diagnozowania wad wrodzonych lub zaawansowanych stadiów kiły. Możesz sprawdzić jego poprawność poprzez bezpośrednią reakcję immunofluorescencyjną (RIF-Tr) lub reakcję łańcuchową polimerazy (PCR). W pierwszym przypadku w identyfikacji patogenu pomagają przeciwciała przeciw krętkom i barwnik fluorescencyjny, aw drugim cząsteczki DNA bladego krętnika.

Szukaj patogennego DNA

W badaniu krwi można wykryć nawet pojedynczą cząsteczkę DNA treponema. Postępy w tej dziedzinie są możliwe od 1991 roku, kiedy wynaleziono test łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR). Nośnik informacji dziedzicznej jest propagowany w specjalnych warunkach temperaturowych i wielokrotnie kopiowany przez enzym – polimerazę DNA. Następnie poprzez elektroforezę ujawnia się pożądane fragmenty łańcucha.

To bardzo dokładny i konkretny test. Za granicą stał się złotym standardem diagnozowania kiły. W Rosji PCR jest nadal bardziej badawczy niż kliniczny.

Inny sposób wykrywania krętków podczas sondowania DNA (hybrydyzacja kwasów nukleinowych). W tym przypadku zdenaturowane DNA jest połączone z konkretną sondą. Zmiana koloru filtra, na który nakładane są próbki, wskazuje na zanieczyszczenie.

Serologiczne metody diagnostyczne

Testy serologiczne bezkrętkowe i krętkowe mogą być wykorzystywane do różnych celów diagnostycznych. Podczas analizy wykrywa się przeciwciała przeciwko bladej treponemie we krwi.

Jako ekspresową diagnostykę lub badanie przesiewowe zaleca się odniesienie do następujących testów niekrętkowych:

• RPR - Szybki test plazmy Reagins;
• RST, test przesiewowy Reagin;
• TRUST - test z czerwienią toluidynową i surowicą nieogrzewaną (Toluidin Red Unheated Serum Test);
• USR - test do oznaczania aktywnych reagin osocza (Unheated Serum Reagins);
• VDRL – Laboratorium Badań Chorób Wenerycznych;
• mikroreakcje strącania (MRP) z osoczem lub inaktywowaną surowicą;
• reakcja wiązania dopełniacza (RSK) i jej warianty z antygenem kardiolipiny (RSKk).

Metoda opiera się na poszukiwaniu przeciwciał (IgM i IgG) na lipidy uszkodzonych komórek i lipoproteiny błon patogenów. Powyższe testy wykazują pozytywną odpowiedź już tydzień po pojawieniu się pierwszych syfilidów.

Przeciwciała do samego treponema są wykrywane metodami:

• ELISA - test immunoenzymatyczny - ELISA (test immunoenzymatyczny);
• FTA - reakcje immunofluorescencyjne - RIF (Fluorescencyjne przeciwciało krętkowe);
• RW - reakcje wiązania dopełniacza (reakcja Wassermana);
• RW z antygenem krętkowym - RSKt;
• TPHA - reakcje biernej hemaglutynacji - TPHA (Treponema pallidum hemaglutination assay);
• TPI - reakcje unieruchomienia bladego treponemy - RIBT lub RIT (Treponema pallidum immobilization test);
• Western Blot - immunoblotting.

Wenerolodzy stosują określoną procedurę przeprowadzania testów serologicznych. Jako ekspresową diagnostykę wykonuje się jeden z testów niekrętkowych. Uwzględnia się niską wrażliwość we wczesnych i późnych stadiach infekcji. Dlatego zarówno negatywne, jak i pozytywne odpowiedzi z pewnym obrazem klinicznym należy ponownie sprawdzić metodami krętkowymi.

W różnych sytuacjach życiowych można zaobserwować kombinacje odpowiedzi pozytywnych i negatywnych. Tabela pomoże je rozszyfrować.

Ostateczne wnioski wyciąga wenerolog na podstawie zestawu danych: obrazu klinicznego, badań histologicznych i laboratoryjnych.

Źródła:

1. Akovbyan V.A., Prochorenkov VI, Novikov A.I., Guzey T.N. // Kiła: ilustracja. hands-in (red. V.I. Prochorenkov). - M.: Medkniga, 2002. - S. 194-201.
2. Dmitriev G.A., Frigo N.V. // Kiła. Diagnostyka różnicowa kliniczna i laboratoryjna. – M.: Med. książka, 2004. - S. 26-45.
3. Loseva OK, Lovenetsky A.N. Epidemiologia, klinika, diagnostyka i leczenie kiły: przewodnik dla lekarzy. - M., 2000.
4. Pankratov V.G., Pankratov O.V., Navrotsky A.L. itp. // Przepis (Załącznik: Międzynarodowa Konferencja Naukowo-Praktyczna „Nowoczesne podejście do diagnozowania, leczenia i zapobiegania zakażeniom przenoszonym drogą płciową”, Grodno, 2005). - 2005r. - S. 165-169.
5. Pankratov V.G., Pankratov O.V. // Nowoczesne możliwości diagnostyki laboratoryjnej kiły i interpretacji wyników badań. – Mińsk, Białoruska Akademia Medyczna Kształcenia Podyplomowego, 2006.
6. Pankratov V.G., Pankratov O.V., Krukovich A.A. itp. // Opieka zdrowotna. - 2006. - nr 6. - str. 35-39.
7. Rodionow A.N. // Kiła: przewodnik dla lekarzy. - Petersburg: Piotr, 1997. - S. 226-245.
8. Jurado R.L. // STD. - 1997. - nr 3. - S. 3-10.
9. Schmidt B.L. // Pierwszy Rosyjski Kongres Dermatowenerologów: streszczenie. naukowy Pracuje. - Petersburg, 2003. - T. II. - S. 40-41.
10. Romanowski B., Sutherland R., Flick G.H. i in. // Ann. Med. -1991. - V. 114. - P. 1005-1009.