Problemen van serologische diagnose van syfilis. Interpretatie van de resultaten van serologische studies. Moderne laboratoriummethoden en algoritmen voor het diagnosticeren van syfilis Identificatie en procedure voor het diagnosticeren van syfilis
Syfilis is een infectieziekte die wordt veroorzaakt door de spirocheet Treponema pallidum, vatbaar voor een progressief chronisch beloop, met een duidelijke periodisering van klinische symptomen.
Het overwicht van seksuele overdracht over contact en transplacentair plaatst deze ziekte in een aantal seksueel overdraagbare aandoeningen (soa's, soa's). Naast deze methoden van infectieoverdracht speelt de kunstmatige route (van het Latijnse "artificio" - kunstmatig gecreëerd) een speciale rol.
Het is typisch voor medische instellingen, voornamelijk geïmplementeerd in een ziekenhuisomgeving. Infectie vindt plaats tijdens bloedtransfusies, verschillende chirurgische ingrepen, invasieve diagnostische methoden.
Ondanks de quarantaine van donorbloed is het probleem van het opsporen van syfilis bij donoren in verschillende stadia van de ziekte nog steeds actueel.
Daarom vereisen diagnostische maatregelen voor syfilis standaardisatie, de introductie van nieuwe gevoelige en informatieve identificatiemethoden, evenals het minimaliseren van fouten en verkeerde interpretatie van testresultaten.
- 1 Screening en profylactisch medisch onderzoek van bevolkingsgroepen (o.a. zwangerschap, inschrijving op de prenatale kliniek, tewerkstelling en inschrijving medisch boek, enzovoort).
- 2 Screening in risicogroepen (onbeschermde seks met een met syfilis besmette persoon, personen na gedwongen seksueel contact, hiv-geïnfecteerden, enzovoort).
- 3 Personen met symptomen of een vermoeden van een syfilitische infectie.
- 1 Identificatie van Treponema pallidum in het donkerveld (donkerveldmicroscopie).
- 2 Infectie van proefdieren (kweken bij proefdieren).
- 3 PCR (polymerasekettingreactie).
- 4 DNA-probe of hybridisatie nucleïnezuren.
- 1 Non-treponemale testen:
- Wasserman-reactie (RSK);
- Microprecipitatiereactie (MR, RMP) en zijn analogen, die hieronder worden gegeven;
- Snelle plasma-reagin-test (RPR, RPR);
- Test met rode toluidine en serum (TRUST);
- Niet-treponemale test van het Laboratorium voor de Studie van Seksueel Overdraagbare Aandoeningen - VDRL.
- 2 Treponemale testen:
- R-tion van immobilisatie van Treponema pallidum - RIBT / RIT;
- R-tie van immunofluorescentie - RIF, FTA (verdunning van sera RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
- R-tie van passieve hemagglutinatie (RPHA, TRPGA, TPHA);
- ELISA (ELISA, EIA);
- Immunoblotting.
- 1 Minimale gevoeligheid in het stadium van primaire syfilis - 70%;
- 2 Minimale gevoeligheid in het stadium van late syfilis - 30%;
- 3 Mogelijkheid van fout-negatieve en fout-positieve resultaten;
- 4 De complexiteit van de implementatie van het RSC.
- 1 Relatief lage kosten van testproductie;
- 2 Krijg een snelle reactie;
- 3 Mogelijkheid van hun aanvraag voor screening.
- 1 Schending van de uitvoeringstechnologie, bij het blokkeren van het AG-AT-complex.
- 2 De patiënt heeft auto-immuunziekten (reumatoïde artritis, reuma, sclerodermie, systemische lupus erythematosus, sarcoïdose, enz.).
- 3 Maligne neoplasmata.
- 4 Virale en bacteriële infecties.
- 5 Endocriene ziekten (auto-immuunthyreoïditis, diabetes mellitus).
- 6 Zwangerschap.
- 7 Alcohol drinken.
- 8 Vet voedsel eten.
- 9 ouderdom.
- 1 relatief hoge gevoeligheid;
- 2 relatief hoge specificiteit;
- 3 gemak van implementatie;
- 4 lage kosten van reagentia;
- 5 krijgt een snelle reactie.
- 1 Van 0 tot 20 - negatieve test.
- 2 Van 21 tot 50 - zwak positieve test.
- 3 Van 50 tot 100 - positieve reactie.
- 1 De maximale respons (sterk positieve test) wordt aangegeven met 4 kruisjes.
- 2 Een positief monster wordt aangegeven met 3 kruisjes.
- 3 Een zwak positieve reactie wordt aangegeven met twee kruisjes.
- 4 Eén kruisje duidt op een dubieus en negatief resultaat.
- 5 Een negatief antwoord wordt gemarkeerd met een minteken.
Toon alles
1. Classificatie van diagnostische laboratoriummethoden
De diagnose van syfilis heeft enkele kenmerken en verschilt van de diagnose van andere bacteriële infecties. De complexe structuur en antigene eigenschappen van bleek treponema veroorzaken fouten bij de interpretatie van de resultaten van serologische tests.
Een bloedtest voor syfilis wordt aangeboden aan 3 hoofdgroepen van patiënten:
Alle laboratoriummethoden zijn voorwaardelijk onderverdeeld in direct en indirect.
1.1. Directe methoden
1.2. Indirecte methoden
Serologische reacties zijn diagnostische laboratoriummethoden die zijn gebaseerd op de detectie van antilichamen (afgekort als AT) tegen antigenen van bleek treponema (afgekort als AG). Ze zijn essentieel voor het bevestigen van de diagnose.
Figuur 1 - Syfilis-serodiagnose-algoritme
1.3. Histomorfologische methoden
Deze methoden zijn beperkt tot het identificeren van de kenmerken van de histomorfologie van syfilitische manifestaties. Er wordt aandacht besteed aan de subtiliteiten van de structuur van de harde chancre. Differentiële diagnose van infectie met behulp van histologie is echter erg moeilijk. Histomorfologie wordt gebruikt met andere laboratorium- en klinische tests.
2. Donkerveldmicroscopie van Treponema pallidum
Deze methode is gebaseerd op de directe detectie van bleek treponema in het onderzochte materiaal met behulp van een microscoop en speciale apparaten (meestal afscheiding van erosies en zweren, minder vaak hersenvocht en andere substraten).
Met behulp van littekenvorming, schrapen, knijpen uit erosies en ulceratieve defecten, wordt exsudaat verkregen, waarna het voorbereide preparaat onder een microscoop wordt onderzocht.
Gewoonlijk worden bleke treponema's gedetecteerd in het preparaat dat wordt verkregen uit de kans, uit de foci van secundaire verse, secundaire terugkerende syfilis, evenals punctaat van de lymfeklieren, placenta.
Gebaseerd op het fenomeen van de gloed van kleine deeltjes in een donker veld wanneer ze worden geraakt door een lichtstraal (Tyndall-fenomeen), kunt u met de methode perfect de veroorzaker van syfilis onderscheiden van andere treponema's op basis van morfologische verschillen en verschillen in de manieren de bacterie beweegt.
Voor microscopie wordt een speciale donkerveldcondensor met de juiste optische resolutie gebruikt. Het medicijn wordt verkregen door de crushed drop-methode (een druppel materiaal wordt aangebracht op een schoon, vetvrij glasplaatje en bedekt met een zeer dun dekglaasje).
Onderdompelingsolie valt op het dekglaasje. Door de buis te draaien en de vergrootlens te draaien, wordt de gewenste verlichting ingesteld.
In het donkere veld van de microscoop worden bloedcellen, epitheelcellen en de veroorzaker van syfilis gedetecteerd. Bleek treponema ziet eruit als een spiraal, erg dun, straalt een zilverachtige kleur uit, met vloeiende bewegingen.
Figuur 2 - Donkerveldmicroscopie als een manier om bleek treponema in het bestudeerde materiaal te visualiseren. Afbeeldingsbron - CDC
Treponema pallidum moet worden onderscheiden van andere treponema's, waaronder Tr. refringens, die kan worden gevonden in de orofarynx en genitale mucosa. Deze bacterie maakt chaotische bewegingen, heeft brede en asymmetrische, vrij grove krullen. Bovendien onderscheidt Treponema pallidum zich van Tr. Microdentium, tr. Buccalis en Tr. vincenti.
Visualisatie van bacteriën in een donker veld wordt soms aangevuld met een fluorescentiereactie. Hiervoor worden antitreponemale antilichamen gelabeld met een fluorescerende kleurstof aan het natieve materiaal toegevoegd. Dit vormt een complex genaamd antigeen-antilichaam (afgekort als AG-AT), dat het onderwerp is van studie met behulp van een fluorescentiemicroscoop.
3. Methode van polymerasekettingreactie (PCR)
PCR, ontwikkeld in 1991 om het deoxyribonucleïnezuur (DNA)-molecuul van treponema pallidum te detecteren, is zeer gevoelig en specifiek, waardoor DNA-fragmenten van de ziekteverwekker kunnen worden gedetecteerd.
Deze analyse is gebaseerd op het kopiëren van korte stukjes spirocheet pallidum-DNA, dat voldoet aan de gespecificeerde parameters en aanwezig is in het monster. Dit alles gebeurt onder kunstmatige omstandigheden (in vitro). De reactie wordt uitgevoerd in een apparaat - een versterker, die zorgt voor periodisering van temperatuurcycli. Er vindt koeling plaats, gevolgd door verwarming van de reageerbuizen met een fout van 0,1 .
De DNA-matrijs wordt 2 minuten verwarmd op een temperatuur van 92-98°C (de maximale temperatuur wordt gebruikt als het polymerase thermostabiel is). Bij verhitting divergeren de DNA-strengen door de afbraak van waterstofbruggen ertussen. In de annealingsstap wordt de reactietemperatuur verlaagd om de primer aan de enkelstrengs template te binden.
Het gloeien duurt ongeveer 30 seconden, waarin honderden nucleotiden worden gesynthetiseerd. De nieuw gesynthetiseerde moleculen worden gekopieerd door het polymerase, waardoor specifieke fragmenten van deoxyribonucleïnezuur vele malen groter worden. De daaropvolgende detectie van fragmenten wordt uitgevoerd met behulp van agargelelektroforese.
PCR-diagnostiek van syfilis is nog experimenteel van aard, maar het is gerechtvaardigd wanneer een aangeboren infectie wordt gedetecteerd, in moeilijke diagnostische gevallen of met een minimaal gehalte aan bleek treponema in het testmateriaal.
4. DNA-hybridisatie
DNA-hybridisatie wordt in vitro uitgevoerd en is gebaseerd op de volledige of gedeeltelijke verbinding van twee enkelstrengs DNA-moleculen tot één molecuul. In het geval van een volledige match van complementaire fragmenten, is de vereniging eenvoudig. Als de complementaire match gedeeltelijk is, vindt de associatie van DNA-ketens langzaam plaats. Op basis van het tijdstip van ketenfusie kan de mate van complementariteit worden geschat.
Wanneer DNA wordt verwarmd in een bufferoplossing, worden waterstofbruggen verbroken door stikstofbasen die complementair zijn, met als resultaat dat DNA-ketens divergeren. Vervolgens wordt een preparaat verkregen uit twee gedenatureerde desoxyribonucleïnezuren. Na afkoeling renatureren de enkelstrengs gebieden. Er ontstaat een zogenaamde DNA-hybride.
De methode maakt het mogelijk om de annealingsnelheid in te schatten en te analyseren, rekening houdend met de kenmerken (overeenkomsten en verschillen) van DNA tussen soorten of binnen een soort.
Het gebruik van een DNA-probe bestaat uit het hybridiseren van een gelabeld DNA-fragment met een specifiek DNA-gebied om complementaire nucleotidesequenties te identificeren. Een groep onverzadigde atomen (chromoforen) of radioactieve isotopen wordt gebruikt om de sonde te labelen.
De DNA-probe wordt gebruikt voor heterogene en homogene detectie van nucleïnezuren. De rol van de sonde is om de gebieden te bepalen waar de doel-sondefusie heeft plaatsgevonden. Detectie in een homogeen systeem heeft het voordeel dat de hybridisatie van DNA-moleculen in realtime kan worden gevolgd.
De essentie van de methode is teruggebracht tot DNA-denaturatie en -renaturatie (hereniging van DNA-ketens). Het proces van renaturatie van nucleïnezuur en DNA-probe eindigt met de vorming van een "hybride".
Specifieke nucleïnezuursequenties hybridiseren met een DNA-probe en worden zo gedetecteerd en maken het mogelijk om de hoeveelheid DNA in het testmateriaal te schatten.
5. Infectie van proefdieren
De hoge gevoeligheid van konijnen voor Treponema pallidum (ongeveer 99,9%) maakt het mogelijk ze te gebruiken bij de diagnose van syfilitische infectie.
Infectie van konijnen wordt uitgevoerd in onderzoekscentra en is de "gouden standaard" voor het beoordelen van de gevoeligheid van andere methoden.
Laten we terugkeren naar treponemale en niet-treponemale tests, omdat ze het vaakst worden gebruikt. Overweeg hun voor- en nadelen, evenals fouten bij de interpretatie van de resultaten.
6. Niet-treponemale tests
Dit zijn tests om te bepalen: IgG-antilichamen en IgM tegen het gestandaardiseerde cardiolipine-antigeen. Hun belangrijke nadeel is hun relatief lage specificiteit.
Door de lage kosten en het gemak van implementatie kunnen deze tests worden geclassificeerd als diagnostische screeningtests die nodig zijn voor het stellen van een voorlopige diagnose en screening onder de bevolking.
Het zijn niet-treponemale tests die worden gegeven bij het registreren van een medisch boek, het solliciteren naar een baan, het registreren in een prenatale kliniek.
nadelen:
Voordelen:
Het verkrijgen van vals-positieve of zwak-positieve monsters is mogelijk in de volgende gevallen:
Zoals je aan de lijst kunt zien, zijn er genoeg redenen voor een onjuist resultaat. Daarom moet het met grote voorzichtigheid worden behandeld. Laten we naast RSC nog twee voorbeelden bekijken. Dit is een microprecipitatiereactie en VDLR (de modificatie ervan).
7. Complementaire fixatiereactie (RSK, Wasserman, RW)
Dit is een test gebaseerd op het vermogen van complement om te binden aan AG-AT-complexen. Het resulterende complex wordt geïdentificeerd met behulp van een hemolytisch systeem. Cardiolipine-antigeen verhoogt de gevoeligheid van het monster aanzienlijk.
Gevoelig is de Colmer-reactie, die bestaat uit het uitvoeren bij verschillende temperatuuromstandigheden. Zo verloopt de eerste fase van de Colmer-reactie gedurende een half uur bij een temperatuur van 20°C, de tweede fase bij een temperatuur van 4-8°C gedurende 20 uur. Gedurende deze tijd vindt complementbinding plaats.
Bij het uitvoeren van RSK is het mogelijk om sterk positieve resultaten te verkrijgen. De reden is waarschijnlijk een hoge antilichaamtiter in onverdund serum. In dit geval worden de monsters met afnemende doses geplaatst.
Om de stadia van syfilis te onderscheiden en de effectiviteit van antisyfilitische behandeling te evalueren, wordt de hoeveelheid antilichamen in serum bepaald.
De positiviteit van het monster wordt beoordeeld met kruisjes; ook wordt in de Wasserman-, Colmer- en Cann-reacties serumverdunning aangegeven.
8. Microprecipitatiereactie:
Omdat de complexiteit van het uitvoeren van bovenstaande tests hoog is, is een versnelde methode voor syfilis-serodiagnose, de zogenaamde express-methode, de microprecipitatiereactie (afgekort MR, RMP), ontwikkeld voor de brede dekking van medische onderzoeken van verschillende bevolkingsgroepen .
Het wordt uitgevoerd met cardiolipine-antigeen en hulpstoffen. Het voordeel is de verzameling van perifeer bloed voor onderzoek. Dit versnelt zowel de techniek zelf als het werk van laboratoriumassistenten aanzienlijk.
Figuur 2 - Microprecipitatiereactie (schema)
MR vereist plasma of geïnactiveerd serum van de patiënt (ze bevatten antilichamen). Vervolgens wordt het plasma in de gemarkeerde putjes geplaatst. Vervolgens wordt een druppel cardiolipine-antigeen aan het testmateriaal toegevoegd, gemengd en geschud. Als gevolg hiervan verschijnen er karakteristieke schilfers in het serum van de besmette persoon, variërend in intensiteit.
Dit is een kwaliteitstest. Kwantificering maakt gebruik van 10 verdunningen van serum die in 10 correct gelabelde putjes worden geplaatst. Bij kwalitatieve MR wordt de respons aangegeven in de vorm van kruisjes (plusjes) of min, bij kwantitatieve MR wordt de antilichaamtiter aangegeven (1:2, 1:4, enzovoort).
De aanwezigheid van vlokken wordt beschouwd als een positieve of zwak positieve reactie. Het verschijnen van een vlok is ook mogelijk in afwezigheid van een ziekte, daarom wordt de uiteindelijke beoordeling van het verkregen resultaat uitgevoerd na een controleonderzoek of andere reacties (RIBT, RIF, ELISA, RPHA).
9. VDR
De door de Wereldgezondheidsorganisatie aanbevolen methode voor het opzetten van een reactie met een antigeen van lipoïde aard (AH) wordt terecht als de beste beschouwd onder andere standaard niet-treponemale tests. Ontwikkeld in de VS, Georgië in het laboratorium voor geslachtsziekten (Veneral Diseases Research Laboratories).
De afkorting van de instelling diende als de naam voor het monster - VDRL. VDRL is een wijziging van MP. Serum van een patiënt met syfilis wordt geïnactiveerd en op een glasplaatje geplaatst. Het gebruikte antigeen bestaat uit cardiolipine, cholesterol en lecithine in verschillende percentages. Het antwoord wordt vrijwel direct geregistreerd.
Duidelijke uitvlokking vindt plaats in aanwezigheid van antilichamen in het serum. Serum wordt 4 weken na infectie reactief. Om de hoeveelheid antilichamen te beoordelen, wordt het serum exponentieel voorverdund.
VDR-voordelen:
Het nadeel van VDRL is het relatief hoge percentage valse positieven.
Hun oorzaken zijn allemaal dezelfde ziekten die hierboven zijn vermeld.
Treponemale tests worden uitgevoerd met specifieke Treponema pallidum-antigenen. Ze zijn noodzakelijk en verplicht voor het stellen van de definitieve diagnose. Dit is een immunofluorescentiereactie (RIF), indirecte hemagglutinatiereactie (IPHA), enzymimmunoassay (ELISA), enz.
Na een positief resultaat van een niet-treponemale test (RPR, MP, VDRL), moeten altijd treponemale tests worden uitgevoerd (vaker een combinatie - RPHA, ELISA, RIF).
Treponemale tests zijn moeilijker uit te voeren dan snelle tests en kosten meer geld.
10. RIF
Deze reactie (afgekort als RIF) wordt gebruikt om syfilis te diagnosticeren, inclusief latente vormen, en om positieve en fout-positieve monsters opnieuw te controleren.
RIF is gebaseerd op de gloed van gelabelde antilichamen in combinatie met een antigeen-antilichaamcomplex onder een kwartslamp. De methode werd in de jaren 60 gebruikt en onderscheidde zich door het gemak van implementatie en hoge specificiteit (die iets inferieur is aan RIBT).
Het heeft verschillende modificaties: RIF-10, RIF-200 en RIF-abs.
De meest gevoelige RIF in verdunning is 10 keer, en de rest is specifieker. RIF wordt in twee fasen uitgevoerd. Het bloedserum van de patiënt wordt aan de AG toegevoegd. Er wordt een AG-AT-complex gevormd, dat in de volgende fase wordt onderzocht. Het met fluorochroom gelabelde complex wordt vervolgens geïdentificeerd door microscopie. Als er geen gloed wordt waargenomen, duidt dit op de afwezigheid van specifieke antilichamen in het bloedserum.
RIF-200 is de meest waardevolle van alle verdunningen. De methode is ontworpen om verschillende vormen van syfilis te diagnosticeren, met name latente syfilis, en om positieve monsters opnieuw te controleren.
11. RIBT
Treponema pallidum immobilisatiereactie (afgekort RIBT, RIT) is een van de complexe serologische tests die aanzienlijke inspanning en financiële kosten vergen. RIBT wordt steeds minder gebruikt, maar de relevantie ervan blijft bij de diagnose van latente syfilis.
Het is van groot belang bij de herkenning van fout-positieve resultaten bij zwangere vrouwen en is gebaseerd op de immobilisatie van bacteriën in aanwezigheid van immobilisines - late antilichamen.
Het resultaat wordt beoordeeld op het percentage (%) geïmmobiliseerd treponema met behulp van een speciale tabel:
Vals positieve resultaten zijn ook mogelijk met RIBT. Zo is een onjuist antwoord mogelijk bij infectie met tropische trepanematose, maar ook bij tuberculose, levercirrose, sarcoïdose en seniele patiënten.
12. RPGA
Deze bloedtest voor syfilis wordt een passieve hemagglutinatietest genoemd (afgekort als bloed voor TPHA, TPHA).
Antigeen voor TPHA wordt bereid uit ramerytrocyten die zijn bekleed met fragmenten van bleke treponema's (verkregen van geïnfecteerde konijnen (zie figuur 4)). Voor analyse wordt veneus bloed (plasma of geïnactiveerd serum) van de patiënt gebruikt.
Wanneer het antigeen wordt toegevoegd aan het serum van een patiënt met syfilis, wordt een AG-AT-complex gevormd, wat leidt tot agglutinatie van rode bloedcellen. agglutinatie wordt subjectief bepaald door een laboratoriumassistent.
Figuur 3 - Schema van RPHA (passieve hemagglutinatiereactie)
Het monster wordt als positief beoordeeld wanneer agglutinaten met een uniforme roze kleur verschijnen. De kleur van het precipitaat in rood geeft de afzetting van erytrocyten aan. RPHA is zeer gevoelig en zeer specifiek.
12.1. Microhemagglutinatiereactie
Het is een vereenvoudigde versie van de RPGA. Verschilt van het hierboven beschreven monster doordat het minder antigeen, verdunningsmiddel en bloedserum heeft om de reactie uit te voeren. Het monster kan 4 uur na serumincubatie worden beoordeeld. Het wordt gebruikt bij screening en massale onderzoeken voor syfilis.
13. Enzym-immunoassay
Enzym-linked immunosorbent assay (afgekort als ELISA) is gebaseerd op een specifieke antigeen-antilichaamreactie. Biologisch materiaal (bloedserum van de patiënt, hersenvocht) wordt in de putjes gebracht, op het vaste oppervlak waarvan antigenen van bleek treponema zijn gefixeerd. Het testmateriaal wordt geïncubeerd, waarna de antilichamen die niet aan de antigenen zijn gebonden, worden weggewassen (zie figuur 5).
Identificatie van het resulterende complex wordt uitgevoerd in het fermentatiestadium met behulp van immuunserum dat met het enzym is gelabeld. Tijdens een chemische reactie kleurt het enzym de resulterende complexen. De intensiteit van de kleuring hangt af van de hoeveelheid specifieke antilichamen in het bloed van de patiënt en wordt geregistreerd door een spectrofotometer.
Figuur 4 - Schema van ELISA (enzymatische immunoassay)
ELISA-gevoeligheid is meer dan 95%. De methode wordt gebruikt in een geautomatiseerde modus om decretieve bevolkingsgroepen te bestuderen: donoren, zwangere vrouwen en anderen, om de diagnose te verduidelijken in geval van positieve en fout-positieve non-treponemale tests.
14. Immunoblotting
Immunoblotting is een zeer gevoelige methode, een wijziging van een eenvoudige ELISA. De reactie is gebaseerd op elektroforese met de scheiding van bleke treponema-antigenen.
Gescheiden immunodeterminanten worden overgebracht op nitrocellulosepapier en getoond in ELISA. Serum wordt vervolgens geïncubeerd en ongebonden antilichamen worden afgewassen. Het resulterende materiaal wordt behandeld met enzym-gelabelde immunoglobulinen (IgM of IgG).
15. Klinische evaluatie van de resultaten van laboratoriumdiagnose van syfilis
In onderstaande tabel 1 hebben we de mogelijke resultaten van de analyses en hun interpretatie gegeven. Zoals u in de tabel kunt zien, is de belangrijkste waarde bij het ontcijferen de uitgebreide beoordeling van tests.
Tabel 1 - Ontcijferen van de resultaten van serologische reacties (bloedonderzoek voor syfilis). Klik op de tafel om te bekijken
De reactiviteit van tests wordt ook geëvalueerd door "kruisjes":
Het probleem van het optimaliseren van de laboratoriumdiagnose van syfilis heeft tot op heden zijn relevantie niet verloren. Moderne diagnostische methoden, ondanks de wens van wetenschappers om diagnostiek naar de hoogst mogelijke gevoeligheid en specificiteit te brengen, vereisen een controlecontrole en een individuele benadering.
Een kenmerk van syfilitische infectie is het fenomeen seroresistentie, dat geen wetenschappelijke verklaring heeft gekregen. De diagnose wordt gesteld na een volledig onderzoek van de patiënt met epidemiologische, klinische laboratoriummethoden.
Tegen de achtergrond van de economische en technische ontwikkeling van de geneeskunde is er ook vooruitgang in de ontwikkeling van nieuwe criteria voor het diagnosticeren van syfilis. Dit alles stelt u in staat om patiënten snel, succesvol en nauwkeurig te behandelen.
Indirecte methoden voor het diagnosticeren van syfilis.
Voor de diagnose van syfilis worden veel onderzoeksmethoden gebruikt, die verschillen in techniek en doel. Directe methoden zijn gericht op het detecteren van de ziekteverwekker in het testmateriaal met behulp van microscopie (donkerveldmicroscopie, etc.) of PCR.
Naast de methoden voor directe detectie van bleek treponema (T. pallidum), bij onderzoek naar syfilis, indirect ( serologisch) onderzoeksmethoden die antilichamen tegen de veroorzaker van syfilis detecteren in bloedserum en cerebrospinale vloeistof. Indirecte methoden voor het diagnosticeren van syfilis omvatten serologische tests van ELISA, RPHA, CSR, RIF en RIF-abs, RIBT, PCR, express-methode, immunoblot en andere.
Serologische methoden voor het diagnosticeren van infectieziekten.
Serologische diagnostische criteria gebaseerd op specifieke antigeen-antilichaamreacties. Antigenen (componenten van celwanden, flagellen, capsules, DNA en toxines) van die micro-organismen die moeten worden bepaald, reageren met antilichamen in sera. Binding vindt plaats tussen antigenen en hun overeenkomstige antilichamen, wat de basis is van serologische diagnostische methoden. Serologische tests worden gebruikt om een onbekend antigeen (waarvan de bron een bacterie, virus, toxine, enz. is) te detecteren met behulp van een bekend antilichaam of om een antilichaam in serum te detecteren met behulp van een bekend antigeen.
Serologische reacties worden geclassificeerd afhankelijk van de toestand van het antigeen en de kenmerken van de omgeving waarin het antigeen en antilichaam interageren, evenals volgens de methode van uitvoering.
Om serologische reacties uit te voeren, worden veel laboratoriummethoden gebruikt, zoals agglutinatie, precipitatie, complementfixatie, immunofluorescentie, enzymimmunoassay en radioimmunoassay, en andere. Deze reacties maken een efficiënte voorlopige identificatie van micro-organismen mogelijk.
De sera die nodig zijn voor het ontstaan van serologische reacties worden experimenteel verkregen, met name geproduceerd door de instituten voor vaccins en sera, en worden aangeboden als onderdeel van commerciële diagnostische kits.
Serologische methoden zijn een belangrijk hulpmiddel bij diagnose en behandeling infectieziekten mensen en dieren, omdat het met hun hulp niet alleen mogelijk is om de veroorzaker van de ziekte te identificeren, maar ook om specifieke antilichamen tegen de overeenkomstige pathogenen in het bloed van patiënten en herstelde patiënten te detecteren. Serologische methoden in tegenwoordige tijd zijn de meest effectieve diagnostische methoden wanneer het onmogelijk of moeilijk is om de ziekteverwekker te isoleren, en geven relatief zelden vals-positieve en vals-negatieve resultaten.
Serologische methoden gebruiken om syfilis te diagnosticeren
De basis van serologische laboratoriummethoden voor het diagnosticeren van syfilis is het vermogen van het lichaam om een immuunrespons te geven op het verschijnen van de ziekteverwekker. Met behulp van serologische reacties in het serum (plasma) van bloed (of cerebrospinale vloeistof) worden sporen van de immuunrespons op infectie gedetecteerd, namelijk antilichamen tegen bleke treponema-antigenen, of de antigenen zelf.
Om de specifieke aard van het bestaande vast te stellen klinische verschijnselen(d.w.z. dat ze een gevolg zijn van syfilis) en om in de toekomst de dynamiek van het pathologische proces te beheersen, werd voorgesteld een groot aantal van serologische onderzoeksmethoden. Deze zelfde methoden worden ook veel gebruikt voor bevolkingsonderzoek.
In overeenstemming met de huidige nationale richtlijnen en klinische richtlijnen worden in veel landen over de hele wereld geavanceerde serologische methoden gebruikt bij bevolkingsonderzoeken om patiënten met syfilis te identificeren en om een klinische diagnose te stellen. Ze worden gebruikt alsof klinische symptomen ziekte bij patiënten en in latente perioden.
Het instellen van serologische reacties is een van de meest betrouwbare methoden voor het diagnosticeren van syfilis. Gestandaardiseerde serologische tests met een gereguleerde methode van vaststelling worden serologische tests voor syfilis genoemd. Aangezien bijna alle serologische reacties op syfilis onder bepaalde omstandigheden vals-positief of vals-negatief kunnen zijn, moeten ze in een complexe en zo nodig in dynamiek worden geplaatst.
Serologische tests, die worden gebruikt om antilichamen in het bloedserum van de patiënt te bepalen, verschillen van elkaar in gevoeligheid, specificiteit, complexiteit van instelling en kosten. Naast klassieke methoden worden immunologische tests en technologieën gebruikt voor effectieve syfilis-serodiagnose, die een nieuwe impuls hebben gekregen voor de ontwikkeling in de 21e eeuw.
Antilichamen worden gedetecteerd met verschillende immunochemische (serologische) methoden, waaronder sedimentaire reacties, enzymimmunoassay, immunochemiluminescentie, immunochromatografische tests, lineaire immunoblotting, flowfluorometrie, immunochiptechnologie en andere.
Serodiagnose (een onderzoek met behulp van serologische methoden) wordt gebruikt voor:
- bevestiging van de klinische diagnose van syfilis,
- diagnose van latente syfilis,
- monitoring van de effectiviteit van de behandeling, als een van de criteria voor de genezing van patiënten met syfilis,
- preventie van syfilis (screening van bepaalde bevolkingsgroepen om pathologie op te sporen).
De belangrijkste eigenschappen die vereist zijn voor serologische tests - gevoeligheid, specificiteit, reproduceerbaarheid
Het beslissende criterium voor het kiezen van een diagnostische laboratoriummethode is de effectiviteit - gevoeligheid, specificiteit en reproduceerbaarheid.
Gevoeligheid is het aandeel positieve resultaten bij patiënten. De gevoeligheid van de methode wordt bepaald door het percentage positieve resultaten van de studie van monsters waarvan bekend is dat ze specifieke markers van het pathogeen bevatten (bijv. pathogene antigenen of antilichamen daartegen).
Specificiteit:- aandeel negatieve testresultaten bij gezonde patiënten. De specificiteit van de methode wordt bepaald door het percentage negatieve resultaten van de studie van monsters die duidelijk geen specifieke markers van de ziekteverwekker bevatten. Dus hoe hoger de sensitiviteit en specificiteit, hoe betrouwbaarder en betrouwbaardere methode Onderzoek.
Belangrijke diagnostische criteria omvatten ook: reproduceerbaarheid resultaten van herhaalde onderzoeken van dezelfde monsters. Opgemerkt moet worden dat, ondanks aanzienlijke vooruitgang in geavanceerde technologie, er geen methoden zijn die 100% (absolute) gevoeligheid en specificiteit bieden in alle onderzochte bioassays.
Momenteel zijn testsystemen, kits en ingrediënten die minder dan 95% sensitiviteit en specificiteit hebben bij het opzetten van een reactie officieel geregistreerd in Rusland. Zo is er altijd de mogelijkheid om een onvoldoende resultaat te krijgen.
Classificatie van tests volgens het type antigeen dat wordt gebruikt. Treponemale en niet-treponemale tests voor syfilis
In de moderne venereologie worden meer dan een dozijn varianten van serologische reacties op syfilis gebruikt voor diagnostische doeleinden, die volgens verschillende criteria in verschillende categorieën kunnen worden onderverdeeld. De classificatie wordt uitgevoerd volgens de onderzoeksmethodologie, reikwijdte, snelheid, lage kosten, vereisten voor laboratoriumapparatuur, enz.
Treponemale reacties zijn theoretisch specifieker, maar ze geven ook vals-positieve resultaten. Bovendien laten ze niet toe om onderscheid te maken tussen onbehandelde en genezen syfilis. De resultaten van treponemale reacties zullen in beide gevallen positief zijn. Niet-treponemale reacties maken onderscheid tussen onbehandelde of recente en genezen infecties.
Tijdens het onderzoek wordt aanbevolen om zowel treponemale als niet-treponemale reacties uit te voeren. Om de diagnose van syfilis vast te stellen en te bevestigen, zijn positieve resultaten vereist voor beide soorten tests - treponemaal en niet-treponemaal. Daarom worden niet-treponemale tests gebruikt in combinatie met treponemale tests en worden ze met bepaalde tussenpozen vóór, tijdens en na het einde van de behandeling uitgevoerd.
1. Niet-treponemale tests
De bekendste van de niet-treponemale tests met een visuele interpretatie van de resultaten zijn:
- RW - Wassermann-reactie met lipide-antigenen (complementfixatiereactie met cardiolipine-antigeen, RSKk)
- Kann-reactie (momenteel niet gebruikt),
- cytocholische reactie van Zaks-Vitebsky (momenteel niet gebruikt),
- microreactie van precipitatie met plasma of geïnactiveerd serum (MRP of RMP),
- RPR (Rapid Plasma reagin-test),
- TRUST (Toluidin Red Unheated Serum Test).
Onder niet-treponemale tests zijn er 2 tests met microscopische aflezing van reactieresultaten:
1. VDRL - (Venereal Disease Research Laboratory);
2. USR - test voor de bepaling van actieve plasmareagins (Unheated Serum Reagins).
Reactiviteit in niet-treponemale tests duidt meestal op weefselbeschadiging en is niet altijd specifiek voor syfilis. Dankzij het gemak van implementatie en lage kosten kunnen ze worden gebruikt als screeningsreacties bij het vaststellen van een voorlopige diagnose van syfilis.
2. Treponemale tests
Treponemale tests gebruiken specifieke treponemale antigenen. Deze tests zijn nodig om de diagnose te bevestigen (RPHA, RIT, RIF en ELISA). Ze zijn complexer en duurder dan Groep 1-tests, maar ook specifieker en gevoeliger. De detectie van antilichamen in de cerebrospinale vloeistof wordt ook uitgevoerd met behulp van treponemale tests.
Traditionele treponemale tests die de diagnose van syfilis bevestigen, vereisen dure laboratoriumapparatuur en ervaren personeel, dus worden ze zelden uitgevoerd buiten gespecialiseerde laboratoria. Ze kunnen nu echter worden vervangen door eenvoudige en snelle treponemale tests die in het veld kunnen worden uitgevoerd en volbloed kunnen worden gebruikt. Het uitvoeren van deze reacties vereist geen langdurige training, speciale voorwaarden voor de opslag van reagentia en apparatuur.
De relatieve goedkoopheid, het gemak en de bruikbaarheid van treponemale expressreacties vestigen de aandacht op hen, niet alleen als methoden om de diagnose te bevestigen. Deze reacties kunnen worden gebruikt om te screenen op syfilis als onderdeel van de eerstelijnszorg. medische zorg(ze kunnen in het veld worden gedaan, in dezelfde zorginstelling) of in gebieden waar geen laboratoria beschikbaar zijn. Aangezien antilichamen tegen T. pallidum echter over een aantal jaren worden bepaald, ongeacht of de patiënt werd behandeld of niet, kunnen treponemale snelle reacties niet worden gebruikt om de effectiviteit van de behandeling en differentiële diagnose van onbehandelde en genezen syfilis te beoordelen.
Classificatie van serologische methoden voor het diagnosticeren van syfilis volgens het type gedetecteerde antilichamen
In de moderne dermatovenereologie worden verschillende serologische reacties op syfilis gebruikt voor de diagnose. Sommige methoden die tien jaar geleden relevant waren, worden niet meer gebruikt vanwege complexiteit of gebrek aan specificiteit. Afhankelijk van de gedetecteerde antilichamen, zijn de methoden voor serologische diagnose van syfilis onderverdeeld in drie groepen:
I. Lipide (reagin) reacties - antilichamen tegen lipide antigenen (reagins) worden bepaald:
1) flocculatie: microreactie op glas met lipide-antigenen - een uitdrukkelijke diagnostische methode (precipitatiemicroreacties - MRP), VDRL, CMF (cardiolipine microflocculatietest), RPR, enz.;
2) complementfixatiereactie (RSK) met lipide-antigenen: Wasserman-reactie (RV), kwalitatieve en kwantitatieve methode van uitharden, thermostatisch en in de kou (Colmer-reactie);
3) sedimentaire reacties die momenteel niet worden gebruikt: de Cahn-precipitatiereactie, de cytocholische Sachs-Vitebsky-reactie, enz.;
II. Groep treponemale reacties - antilichamen tegen groep treponemale antigenen (die deel uitmaken van de microbiële cel van zowel pathogene als saprofytische treponema's) worden bepaald:
1) CSC met Reiter's eiwitantigeen;
2) immunofluorescentiereactie (RIF);
3) immuunadhesiereactie (RIP).
III. Soortspecifieke eiwit treponemale reacties - antilichamen tegen specifieke soortantigenen van Treponema pallidum worden bepaald:
1) reactie van immobilisatie van bleke treponema's (RIT);
2) RIF-abs immunofluorescentiereactie en zijn varianten (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS, enz.);
3) reactie van indirecte hemagglutinatie van bleke treponema's (TPHA) en de modificatie ervan TPPA.
4) enzymimmunoassay (ELISA);
5) immunoblotting.
Praktisch gebruik van serologische tests voor syfilis
Verschillende serologische tests worden gebruikt voor verschillende praktische doeleinden.
In het buitenland worden bij massale bevolkingsonderzoeken en, indien nodig, nooddetectie van syfilis, non-treponemale screeningsreacties (VDRL, RPR, etc.) gebruikt. Diagnose vereist bevestiging door treponemale tests FTA-ABS, TPHA of TPPA. Momenteel wordt aanbevolen om ELISA te gebruiken als vervanging voor VDRL in screeningtests. Dit komt door het feit dat de ELISA-test zich onderscheidt door gevoeligheid, specificiteit, het vermogen om onderzoek te automatiseren, evenals de ontwikkeling van diagnostische testkits. Bovendien wordt een omgekeerd schema van de onderzoeksvolgorde voor syfilis onderbouwd, wanneer eerst treponemale tests worden gebruikt.
Om de effectiviteit van de therapie te controleren en de activiteit van de infectie te beoordelen, wordt kwantitatieve VDRL aanbevolen. Als bevestigende/aanvullende test wordt een ELISA-test voor antitreponemale IgM-antilichamen gebruikt.
In de huishoudelijke praktijk wordt een complex van serologische reacties (CSR) gebruikt, waaronder een microprecipitatiereactie (RMP) met cardiolipine-antigeen en CSC met cardiolipine en treponemale antigenen. Sinds kort wordt in de CSR aanbevolen om RSK te vervangen door ELISA of RPHA. RIF (en zijn modificaties - RIF-Abs en anderen), RIBT worden ook gebruikt.
RIBT wordt gebruikt als onderzoeksreactie bij divergentie van treponemale reacties.
Benaderingen van laboratorium serologische diagnose van syfilis in de Russische Federatie
De introductie van uniforme methoden voor klinisch laboratoriumonderzoek in de praktijk in de USSR en de Russische Federatie maakte het mogelijk om meer geavanceerde diagnostische methoden te introduceren, het werk van klinische diagnostische laboratoria te stroomlijnen, de arbeidsproductiviteit te verhogen, duplicatie van laboratoriumtests te verminderen en werd de basis voor de ontwikkeling van rationele vormen van kant-en-klare reagenskits.
In 1985 werden in de USSR, om de diagnose van syfilis te verbeteren, de niet-treponemale CSC-reactie met een niet-specifiek (Wassermann) antigeen en sedimentaire reacties (cytocholisch en Cana) uitgesloten van het diagnostische complex omdat ze minder gevoelig waren en geen aanvullende informatie.
In plaats daarvan werd, als onderdeel van het complex van serologische tests voor syfilis (CSR), het gebruik van de complementfixatiereactie met treponemale en cardiolipine-antigenen (RSKt) en de microprecipitatiereactie met cardiolipine-antigeen (RMP) verstrekt. De hogere gevoeligheid en het informatiegehalte van dit reactiescomplex zorgde voor de detectie van niet alleen reagins, maar ook antitreponemale antilichamen.
1985
1. RMP met cardiolipine-antigeen met bloedplasma en geïnactiveerd bloedserum. Selectietest in geval van geïsoleerde toepassing.
2. CSC met treponemale en cardiolipide-antigenen; kwalitatieve en kwantitatieve methoden van instellen, thermostatisch en in de kou;
3. Treponema pallidum immobilisatiereactie (RIT); reageerbuis- en melange-methoden voor het zetten;
4. Immunofluorescentiereactie (RIF) in de volgende modificaties: RIF met absorptie (RIF-abs) met bloedserum en capillair bloed, RIF-200, RIF met volledig cerebrospinaal vocht (RIF-c); kwalitatieve en kwantitatieve methodes om te zetten. Diagnose van latente en late vormen van syfilis, herkenning van beslissers (fout-positieve resultaten)
5. Complex van klassieke serologische reacties (CSR): RSC (Wasserman-reactie) met cardiolipine en treponemale antigenen + RMP. Preventief onderzoek van de bevolking op syfilis, diagnose van alle vormen van syfilis, toezicht op de effectiviteit van de behandeling, onderzoek van personen die contact hebben met syfilis.
In 2001 keurde het ministerie van Volksgezondheid van de Russische Federatie een nieuw regelgevend document goed dat de procedure voor het uitvoeren van diagnostische tests regelt - Bevel van het ministerie van Volksgezondheid van de Russische Federatie nr. 87 van 26 maart 2001 "Over het verbeteren van de serologische diagnose van syfilis ".
Om de laboratoriumdiagnose van syfilis te verbeteren, de kwaliteit van het werk te verbeteren en verdere verspreiding van de incidentie van syfilis te voorkomen, wordt aanbevolen om de RSK in het complex van seroreactions (CSR) bij de diagnose van syfilis te vervangen door ELISA en TPHA als screenings- en bevestigingstests, omdat: deze testsystemen zijn zeer gevoelig, specifiek en reproduceerbaar.
Order nr. 87 van 26 maart 2001 "Over het verbeteren van de serologische diagnose van syfilis" voorziet in het gebruik van de volgende methoden voor de diagnose van sero- en hersenvocht van syfilis in Rusland:
1. RMP en vreemde analogen (VDRL, RPR en soortgelijke microreacties) als screeningstesten bij het onderzoeken van de populatie op syfilis. RMP wordt uitgevoerd met plasma of geïnactiveerd bloedserum.
2. Enzym-immunoassay (ELISA). Antigeen van gekweekt of pathogeen treponema pallidum. Diagnostische reacties, ook voor drankdiagnostiek. Vanwege het gemak van instelling en de beschikbaarheid van commerciële testsystemen, kunnen ze worden gebruikt als screeningtests.
3. De reactie van passieve hemagglutinatie (RPHA). Antigeen van gekweekt of pathogeen treponema pallidum. Selectie en diagnostische reacties.
4. Kwalitatieve en kwantitatieve varianten van RIF (RIF-abs, RIF-c, RIF met capillair bloed uit een vinger). Antigeen - pathogeen bleek treponema van de Nichols-stam.
5. Een complex van serologische reacties (CSR) voor syfilis, bestaande uit een complementfixatiereactie (CFR) met treponemale en cardiolipine-antigenen, en RMP. Het is mogelijk om de complementfixatiereactie te vervangen door ELISA of RPHA, ook in combinatie met RMP. MVO verwijst naar diagnostische tests.
6. Pale treponema immobilization reaction (RIBT), waarbij pathogeen treponema pallidum van de Nichols-stam als antigeen wordt gebruikt. RIBT's zijn diagnostische bevestigende tests.
Daarom wordt aanbevolen om de onderzoeksvolgorde van patiënten op syfilis in zorginstellingen als volgt te plannen:
1. Tijdens het eerste onderzoek wordt een selectie (screening) reactie van microprecipitatie (RMP) of de wijziging ervan (RPR, TRUST, VDRL) uitgevoerd in kwantitatieve en kwalitatieve versies en, in geval van een positief resultaat, een specifieke bevestigende treponemale test ( RPHA, ELISA, CSR, RIF, RIT);
2. Na het einde van de therapie wordt RMP of de wijziging ervan geplaatst en worden de dynamiek van het infectieuze proces en de effectiviteit van de therapie beoordeeld aan de hand van de afname van de titer. Een bevestiging van de effectiviteit van de therapie is een verlaging van de titer met 4 of meer keer binnen 1 jaar.
Ontvangst op afspraak! Zaterdag Zondag.
Reagin-tests worden gebruikt voor massale screening van patiënten op syfilis. Ze worden meestal uitgevoerd als onderdeel van preventieve onderzoeken. Dergelijke tests zijn beschikbaar in elke medische instelling en worden snel uitgevoerd. Het antwoord is meestal klaar na 30-40 minuten.
Een positief resultaat bij hernieuwde reacties is geen criterium voor het stellen van een diagnose. Aanvullende soortspecifieke studies zijn nodig.
De meest gebruikelijke screeningsmethode is de Wasserman-reactie. Het maakt gebruik van cardiolipine en treponemale antigenen. Als er geen reagines in het bloedserum zijn, zal hemolyse van ram-erytrocyten optreden, die als indicator worden toegevoegd.
In aanwezigheid van reagines zullen hele erytrocyten neerslaan, in welk geval de reactie als positief wordt beschouwd.
Reaginic in de volgende gevallen:
- andere ziekten waarvan de veroorzakers qua antigene structuur vergelijkbaar zijn met pallidum spirocheet
- zwangerschap
- oncologische ziekten
- salicylaten nemen
- myocardinfarct
- technische fouten in de analyse
Bij een positief resultaat van de reaginische reactie worden specifieke serologische tests uitgevoerd. Ze worden ook voorgeschreven als er twijfel bestaat over een negatief resultaat.
Treponemale antigenen worden gebruikt in testen zoals RIF, RIT, ELISA, TPHA, hemadsorptiereactie in de vaste fase. Deze reacties zijn gebaseerd op de vorming van antigeen-antilichaamcomplexen en verschillen in de methode van hun bepaling. De meest gebruikte reactie is immunofluorescentie.
Het medicijn wordt behandeld met luminescent serum, waarmee u de immuuncomplexen onder een fluorescentiemicroscoop kunt bepalen.
Een van de meest gevoelige serologische tests voor het diagnosticeren van syfilis is TPHA. De methode heeft een hoge nauwkeurigheid. Het wordt vaak gebruikt om de diagnose tijdens de zwangerschap te verifiëren wanneer andere tests een vals-positief resultaat kunnen geven.
Kenmerken van serodiagnose
Voor serologische diagnose van syfilis in de verschillende perioden bloed afnemen uit een ader. Het wordt aanbevolen om de analyse op een lege maag uit te voeren, dit vermindert het aantal fout-positieve resultaten. De buis moet steriel zijn. Bij het uitvoeren van uitdrukkelijke tests wordt in sommige gevallen bloed uit een vinger genomen.
Bij vermoeden wordt cerebrospinale vloeistof ingenomen voor serodiagnose. Voor de analyse worden dezelfde methoden gebruikt als bij de studie van bloed.
Om syfilis te diagnosticeren, moet u een volledig onderzoek in onze kliniek ondergaan.
Rusland verbetert jaar na jaar. Jaarlijks worden echter duizenden zieke mensen ontdekt tijdens testen. Onderzoeken voor deze ziekte worden zowel vóór de zwangerschap als vóór een geplande ziekenhuisopname uitgevoerd. Daarnaast ondergaan jaarlijks vertegenwoordigers van veel beroepen een medische keuring, waarbij u onder andere op syfilis moet worden getest. En natuurlijk, zonder deze analyse, zal de carrière van een ambtenaar, een arts, en simpelweg vacatures zoals leraren, koks en opvoeders voor een persoon worden gesloten.
De moderne geneeskunde kent vele manieren om bleek treponema, de veroorzaker van de ziekte, in menselijk bloed te detecteren. Deze methoden zijn onderverdeeld in verschillende grote groepen:
- In de eerste groep onderzoeken - testen waarbij wordt gezocht naar de aanwezigheid van treponema in het biomateriaal. Hiervoor wordt materiaal genomen voor onderzoek van zweren of zieke organen.
- Met de tweede, serologische groep methoden kunt u indirecte sporen van de aanwezigheid van treponema in het lichaam identificeren. Dit verwijst naar antilichamen, waarvan het lichaam op actieve wijze reageert op een infectie.
Mening van een expert
Artem Sergeevich Rakov, venereoloog, meer dan 10 jaar ervaring
Directe tests werken uitstekend bij de eerste symptomen van de ziekte, serologische tests moeten ongeveer een week na het verschijnen van de eerste zweer worden uitgevoerd. Met andere woorden, als een infectie wordt vermoed, is het het beste om toevlucht te nemen tot tests van het directe type.
Laboratoriumdiagnose van syfilis
Een laboratoriumonderzoek bestaat uit het feit dat secties van treponema-DNA in een reageerbuis worden vermeerderd onder omstandigheden van herhaalde temperatuurcycli. In elke fase verdubbelt het aantal kunstmatig gereproduceerde kopieën van de ziekteverwekker. Experts noemen dit amplificatie van DNA-fragmenten. Er is een scheiding van moleculen op basis van hun gewicht, wat het mogelijk maakt om treponema te identificeren.
PCR
De PCR-onderzoekstechniek zal het mogelijk maken om één syfilismolecuul te vinden, ook al is het er één op duizenden andere moleculen. Genetisch materiaal voor PCR-testen kan rechtstreeks worden genomen uit syfilitische zweren, cerebrospinale vloeistof, placentaweefsel, bloed van een vinger en zelfs zaadvloeistof. Meestal gebruiken artsen weefselvloeistof van zweren.
De efficiëntie van de PCR-studie bereikt 98,6%. Met een goed voorbereid onderzoek zijn vals positieve resultaten met deze methode praktisch uitgesloten. Ook nemen artsen hun toevlucht tot deze techniek als ze uitgaan van een klein gehalte aan treponema's in het testmateriaal. Het is deze factor die bepalend is als het nodig is om een analyse uit te voeren bij een vermoeden van aangeboren syfilis.
Donkerveldmicroscopie
Donkerveldmicroscopisch onderzoek wordt beschouwd als een van de goedkoopste, maar tegelijkertijd effectieve methoden voor het detecteren van de aanwezigheid van bleek treponema, evenals:
- Voor het onderzoek wordt een speciale zoutoplossing gebruikt, waarin het medicijn wordt geplaatst. Daarna wordt een smalle bundel helder licht op de glasplaat gericht. Door het zogenaamde Tyndall-fenomeen beginnen ziekteverwekkers te gloeien in het donkere veld van de oplossing.
- Het beste materiaal voor dit type onderzoek zijn ook weefselvloeistofmonsters die zijn verkregen van genitale ulcera die zich respectievelijk op de geslachtsdelen bevinden. Dit is een van de snelste tests omdat de testresultaten binnen een paar uur klaar zijn.
Houd er echter rekening mee dat de donkerveldmethode geschikt is voor het detecteren van nog levende treponema's. Dienovereenkomstig heeft het weinig zin om zo'n onderzoek te ondergaan na het begin van een externe behandeling, omdat het bijna onmogelijk zal zijn om levende monsters van de ziekteverwekker te detecteren.
RIT-test
De RIT-test omvat het transplanteren van materiaal van een geïnfecteerde persoon in laboratoriumkonijnen. De gevoeligheid van deze dieren voor syfilis-infectie bereikt 100%, dus als bleke treponema's in het biomateriaal van de patiënt aanwezig waren, zullen ze ook het konijn aantasten.
Tegenwoordig wordt deze methode echter praktisch niet gebruikt vanwege de hoge kosten en tijdskosten. Met snellere tests beschikbaar, wachten artsen liever niet tot het dier symptomen van de ziekte vertoont. Deze methode wordt echter nog steeds gebruikt in onderzoek en om de nauwkeurigheid van andere soorten tests te bevestigen of te weerleggen.
Serodiagnose van syfilis
Met serologische methoden kunt u niet de veroorzaker van syfilis in het lichaam isoleren, maar de antilichamen waarmee het lichaam de ziekte probeert te verslaan. Wetenschappers verdelen serologische methoden in twee groepen, die hieronder zullen worden besproken.
Non-treponemale tests omvatten:
- RMP - microprecipitatiereactie met plasma en geïnactiveerd serum;
- RPR - snelle plasma-reagin-test.
Meestal nemen specialisten hun toevlucht tot niet-treponemale tests als het nodig is om massale screening op syfilis uit te voeren. Dit komt door het feit dat dergelijke tests vrij goedkoop zijn, geen speciale laboratoriumapparatuur vereisen en worden gekenmerkt door een relatief hoge nauwkeurigheid.
Ze zijn ook niet minder effectief bij het evalueren van de lopende behandeling. Met hun hulp kunt u snel het niveau van antilichamen tegen syfilis in het bloed controleren.
Treponemale tests omvatten:
- ELISA - enzymimmunoassay;
- RPHA - passieve hemagglutinatiereactie;
- RIF - immunofluorescentiereactie;
- immunoblotting;
- IHL - immunochemiluminescentie;
- RIBT (RIT) - reactie van immobilisatie van bleke treponema's.
Treponemale tests worden voorgeschreven in gevallen waarin u er zeker van moet zijn dat het resultaat van een niet-treponemale test niet vals-positief was. Ze worden ook gebruikt in gevallen waarin het screeningsresultaat met een treponemale test afweek van het resultaat van een niet-treponemale test.
Bovendien zijn treponemale tests goed te gebruiken als de ziekte nog geen zichtbare manifestaties heeft, maar er een vermoeden is van een arts op basis van de geschiedenis en onderzoeksresultaten. Helaas zijn niet-treponemale tests in deze periode niet effectief en geven ze vaak vals-negatieve resultaten.
Express diagnostiek van syfilis
Dit type diagnose wordt meestal gebruikt voor bepaalde groepen patiënten:
- Een gelijkaardige test zou door elke zwangere vrouw moeten worden gebruikt om zowel zichzelf als haar ongeboren kind te beschermen.
- Bovendien kunnen mensen die in dezelfde kamer wonen met syfilitische patiënten, geen anticonceptie gebruiken en vaak van seksuele partner wisselen, deze methode gebruiken. Het is ook geschikt voor mensen die geen volledig onderzoek kunnen ondergaan in een ziekenhuis of kliniek.
Het principe van het gebruik van een sneltest voor syfilis is te vergelijken met het gebruik van een zwangerschapstest, maar je moet er wel een paar druppels bloed in nemen.
De test kan het beste 's ochtends op een lege maag worden gedaan. Twee dagen voor de voorgestelde test raden artsen aan geen alcohol te drinken en ongeveer een uur voor de procedure sigaretten op te geven.
De analyse zelf kost wat tijd:
- De vinger moet worden gedesinfecteerd met een alcoholdoekje, waarna een paar druppels bloed uit de snede op het testapparaat moeten worden geperst.
- Voeg daar dan het meegeleverde reagens toe.
- Gemiddeld moet je 15 minuten wachten voordat het resultaat verschijnt. Experts waarschuwen dat als het resultaat na een half uur verschijnt, het onjuist kan zijn.
Wat is volgens u de meest nauwkeurige diagnostische methode?
SerodiagnostiekExpress Diagnostiek
Houd er rekening mee dat als een persoon recentelijk is geïnfecteerd, de nauwkeurigheid en betrouwbaarheid van dergelijke tests niet groter is dan 80%. Het is dus zeker niet de moeite waard om het gelijk te stellen aan een volwaardig onderzoek door een specialist.
Waar kan ik me laten testen op syfilis?
U kunt een biomateriaalonderzoek voor syfilis bestellen:
- in elke kliniek;
- privé kliniek;
- laboratoria.
Het voordeel van budgettaire instellingen is dat deze dienst daar gratis is. Een belangrijk nadeel is de wachttijd voor analyse, de slechte logistiek van sommige staatsklinieken en het feit dat als syfilis wordt ontdekt, het moeilijk zal zijn om dit feit te verbergen.
Privéklinieken en laboratoria komen overeen om op vertrouwelijke basis met patiënten te werken. Dit is geschikt voor diegenen die niet willen dat hun ziekte bekend wordt. Maar er moet aan worden herinnerd dat het formulier met het resultaat, waar de naam van de patiënt niet voorkomt, door geen enkele organisatie kan worden geaccepteerd.
Natuurlijk moet u de analyse in een particuliere instelling betalen, maar het resultaat kan binnen 2-3 dagen worden gevonden. Bovendien bieden veel klinieken zonder problemen sneltesten aan en rapporteren de resultaten van de tests binnen een paar uur.
Hoeveel kost het om getest te worden op syfilis?
Het prijskaartje voor analyse is afhankelijk van het type. De screeningstest kost de patiënt 300-400 roebel. Een analyse die de aanwezigheid van DNA in een bepaald type biomateriaal bepaalt, kost in de regio 500 roebel.
Natuurlijk variëren de prijzen afhankelijk van de laboratoria, de gebruikte materialen en de uiteindelijke nauwkeurigheid van de test zelf. In dit geval werkt de regel vaak, volgens welke hoe duurder de test, hoe nauwkeuriger deze is.
Syfilis is een verraderlijke ziekte die langzaam maar zeker niet alleen de inwendige organen vernietigt, maar ook het hele lichaam aantast zenuwstelsel persoon. Gelukkig ontwikkelt deze ziekte zich in een rustig tempo, en de wetenschap heeft onthuld effectieve methoden ertegen vechten in de tijd dat ze penicilline uitvond, waarvoor treponema's nog steeds kwetsbaar zijn. Het belangrijkste is dus om op tijd een kwalitatief onderzoek te ondergaan en vervolgens een deskundige arts te raadplegen.
U kunt ook de video in dit artikel bekijken, waar de arts u zal vertellen over de RIF-analyse voor syfilis.
Syfilis is veelzijdig. De infectie, die het lichaam binnendringt, laat niet alleen sporen achter op de huid en geslachtsdelen, maar vernietigt ook het zenuwstelsel, het bewegingsapparaat, de longen en verslechtert het gehoor en het gezichtsvermogen. Ondanks een breed scala aan symptomen en varianten van hun combinaties, hebben artsen geleerd de ziekte te identificeren en nauwkeurig het stadium van ontwikkeling aan te geven.
De samenleving wil zich beschermen tegen besmetting met Treponema pallidum. Daarom zijn er een aantal uitdrukkelijke tests voorzien voor de vroege diagnose van syfilis of de identificatie van dragers van de infectie. De regel was bloedafname voor laboratoriumdiagnostiek:
- in gevallen van zwangerschap;
- voor de operatie;
- van donoren voordat bloed of organen worden gedoneerd voor transplantatie;
- medisch personeel, leraren, opvoeders, cateringpersoneel, enz.;
- militair personeel;
- bij de gevangenen.
Laboratoriumtest en klinisch onderzoek voor syfilis zullen worden uitgevoerd voor:
- patiënten met tekenen van soa's;
- seksuele partners en andere familieleden van een persoon met de diagnose syfilis;
- baby's geboren uit een zieke moeder;
- iedereen bij wie een andere seksueel overdraagbare aandoening is vastgesteld;
- het testen van de effectiviteit van de therapeutische methode tijdens de behandeling;
- iedereen die positief getest is.
De procedure voor het opsporen van infectie op afspraak van een venereoloog
Uit een gesprek met een patiënt komt de arts erachter:
- of de partner een bevestigde diagnose van syfilis heeft;
- of er eerder huiduitslag op de geslachtsdelen is geweest;
- Zijn de lymfeklieren ontstoken?
- of er 3-4 weken geleden onbeschermde seks is geweest.
Tijdens een klinisch onderzoek van de huid, geslachtsorganen, anus, slijmvliezen, ontdekt de specialist de gelijkenis van huiduitslag en andere huidlaesies met die kenmerkend voor syfilis. Perifere lymfeklieren worden zorgvuldig gepalpeerd om de mate van vergroting te beoordelen.
In gevallen van syfiliden (harde chancre, roseol, papels, granulomen) schrijft de arts een histomorfologisch onderzoek voor. Het laboratorium beschrijft: verschijning en bestudeer de inhoud van het onderwijs. Op basis van de resultaten wordt het stadium van de ziekte beoordeeld.
Een beslissende bijdrage aan de diagnose van syfilis wordt geleverd door de laboratoriummethode voor het identificeren van de ziekteverwekker of sporen van de immuunrespons op infectie.
De diagnose wordt gesteld op basis van een combinatie van gegevens verkregen na klinisch onderzoek en laboratoriumonderzoek. In uitzonderlijke gevallen, wanneer het niet mogelijk is om testen uit te voeren, wordt behandeling voorgeschreven op basis van een onderzoek.
Diagnose van complicaties
Secundaire en tertiaire syfilis kunnen complicaties veroorzaken die specifieke visceritis worden genoemd. Alle organen en systemen kunnen in het proces worden betrokken, maar meestal nemen venereologen laesies waar:
- lever;
- zenuwstelsel;
- botten;
- harten.
Syfilis is vooral gevaarlijk voor zwangere vrouwen. Naast gecompliceerde zwangerschap, intra-uteriene of verticale (in het geboortekanaal) infectie van de foetus, is doodgeboorte niet uitgesloten.
Het is belangrijk om niet alleen de infectie, maar ook secundaire ziekten op tijd te diagnosticeren. Hiertoe worden naast specifieke onderzoeken en algemene urine- en bloedonderzoeken aanvullende onderzoeken uitgevoerd (tabel).
Laboratoriumanalyses van biologische materialen
De laboratoriumdiagnose van syfilis begon zich te ontwikkelen sinds 1905, toen de veroorzaker van de ziekte, bleek treponema, werd ontdekt. Daarvoor werden konijnen geïnfecteerd met de inhoud van syfiliden, die 100% vatbaar zijn voor infectie. Al in 1906 ontwikkelde Wasserman de eerste serologische test voor syfilis (RW). In 1949 stelde de geneeskunde een meer specifieke treponema pallidum immobilisatietest (TPT) voor, maar RW is tot op heden niet uit laboratoria verdreven.
De eerste analyses worden vervangen door moderne diagnostische methoden. Ze verschillen in techniek en doel. In de lijst met huidige tests:
- donkerveldmicroscopie - omvat de studie van een uitstrijkje of schrapen om treponema te detecteren in het onderzochte substraat (in het dagelijks leven wordt dit onderzoek soms een "uitstrijkje voor syfilis" genoemd);
- moleculair biologische methoden voor het detecteren van specifiek DNA (polymerasekettingreactie, DNA-sondering);
- serologische diagnose van syfilis in bloedserum of hersenvocht.
Donkerveldmicroscopie
Er worden monsters genomen van de laesies voor microscopisch onderzoek op bleek treponema. De testobjecten zijn:
- inhoud van syfilis;
- weefselvocht;
- likeur;
- vruchtwater;
- navelstreng weefsel.
Treponema heeft het karakteristieke "bleke" gekregen vanwege zijn weerstand tegen de werking van de meeste kleurstoffen. Een levende microbe is duidelijk zichtbaar in een donker veld met speciale verlichting. De laboratoriumassistent vestigt de aandacht op: morfologische kenmerken bacteriën en observeert de aard van hun beweging.
Voor histomorfologisch onderzoek worden monsters gekleurd met zilver (volgens Morozov) of volgens Romanovsky-Giemsa.
Directe microscopiemethoden worden gebruikt om aangeboren ziekten of gevorderde stadia van syfilis te diagnosticeren. U kunt de juistheid ervan controleren door directe immunofluorescentiereactie (RIF-Tr) of polymerasekettingreactie (PCR). In het eerste geval helpen anti-treponemale antilichamen en een fluorescerende kleurstof om de ziekteverwekker te identificeren, en in het tweede geval DNA-moleculen van bleek treponema.
Zoeken naar pathogeen DNA
Zelfs een enkel treponema-DNA-molecuul kan worden gedetecteerd in een bloedtest. Vooruitgang op dit gebied is mogelijk gemaakt sinds 1991, toen de polymerasekettingreactietest (PCR) werd uitgevonden. De drager van erfelijke informatie wordt vermeerderd onder speciale temperatuuromstandigheden en wordt herhaaldelijk gekopieerd door een enzym - DNA-polymerase. Daarna worden door elektroforese de gewenste fragmenten van de keten onthuld.
Dit is een zeer nauwkeurige en specifieke test. In het buitenland is het de gouden standaard geworden voor het diagnosticeren van syfilis. In Rusland is PCR nog steeds meer onderzoek dan klinisch.
Een andere manier om treponema te detecteren tijdens DNA-sondering (hybridisatie van nucleïnezuren). In dit geval wordt het gedenatureerde DNA verbonden met een specifieke probe. Een verandering in de kleur van het filter waarop de monsters worden aangebracht duidt op verontreiniging.
Serologische diagnostische methoden
Serologische non-treponemale en treponemale tests kunnen voor verschillende diagnostische doeleinden worden gebruikt. Tijdens de analyse worden antilichamen tegen bleek treponema in het bloed gedetecteerd.
Als uitdrukkelijke diagnose of screening wordt aanbevolen om te verwijzen naar de volgende niet-treponemale tests:
- RPR - Rapid Plasma Reagins-test;
- RST, Reagin-schermtest;
- TRUST - test met toluidine rood en onverwarmd serum (Toluidin Red Unheated Serum Test);
- USR - test voor de bepaling van actieve plasmareagins (Unheated Serum Reagins);
- VDRL – Onderzoekslaboratorium voor geslachtsziekten;
- precipitatiemicroreacties (MRP) met plasma of geïnactiveerd serum;
- complementfixatiereactie (RSK) en zijn varianten met cardiolipine-antigeen (RSKk).
De methode is gebaseerd op het zoeken naar antilichamen (IgM en IgG) tegen de lipiden van beschadigde cellen en lipoproteïnen van pathogene membranen. Bovenstaande testen laten al een week na het verschijnen van de eerste syfiliden een positief antwoord zien.
Antilichamen tegen treponema zelf worden gedetecteerd door methoden:
- ELISA - enzym-immunoassay - ELISA (Enzymelynked immunosorbent-assay);
- FTA - immunofluorescentiereacties - RIF (Fluorescerend treponemaal antilichaam);
- RW - complementfixatiereacties (Wassermann-reactie);
- RW met treponemaal antigeen - RSKt;
- TPHA - reacties van passieve hemagglutinatie - TPHA (Treponema pallidum hemagglutinatietest);
- TPI - reacties van immobilisatie van bleek treponema - RIBT of RIT (Treponema pallidum immobilisatietest);
- Western Blot - immunoblotting.
Venereologen volgen een specifieke procedure voor het uitvoeren van serologische tests. Als uitdrukkelijke diagnose wordt een van de niet-treponemale tests uitgevoerd. Er wordt rekening gehouden met een lage gevoeligheid in de vroege en late stadia van infectie. Daarom moeten zowel negatieve als positieve reacties met een bepaald klinisch beeld opnieuw worden gecontroleerd met treponemale methoden.
In verschillende levenssituaties kunnen combinaties van positieve en negatieve antwoorden worden waargenomen. De tabel zal helpen om ze te ontcijferen.
De eindconclusies worden door de venereoloog gemaakt op basis van een set gegevens: het ziektebeeld, histologisch en laboratoriumonderzoek.
bronnen:
- Akovbyan V.A., Prokhorenkov V.I., Novikov A.I., Guzey TN. // Syfilis: illustratie. inleveren (red. VI Prokhorenkov). - M.: Medkniga, 2002. - S. 194-201.
- Dmitriev GA, Frigo N.V. // Syfilis. Differentiële klinische en laboratoriumdiagnose. – M.: Med. boek, 2004. - S. 26-45.
- Loseva OK, Lovenetsky A.N. Epidemiologie, kliniek, diagnose en behandeling van syfilis: een gids voor artsen. - M., 2000.
- Pankratov V.G., Pankratov OV, Navrotsky A.L. etc. // Recept (bijlage: International Scientific and Practical Conf. "Modern Approaches to the Diagnosis, Treatment and Prevention of Sexually Transmitted Infections", Grodno, 2005). - 2005. - S. 165-169.
- Pankratov V.G., Pankratov OV. // Moderne mogelijkheden van laboratoriumdiagnostiek van syfilis en interpretatie van onderzoeksresultaten. – Minsk, Wit-Russische medische academie voor postdoctoraal onderwijs, 2006.
- Pankratov VG, Pankratov OV, Krukovich AA enz. // Gezondheidszorg. - 2006. - Nr. 6. - P. 35-39.
- Rodionov AN // Syfilis: een gids voor artsen. - St. Petersburg: Peter, 1997. - S. 226-245.
- Jurado RL // SOA. - 1997. - Nr. 3. - S. 3-10.
- Schmidt B.L. // Eerste Russische congres van dermatovenerologen: samenvatting. wetenschappelijk werken. - St. Petersburg, 2003. - T. II. - S.40-41.
- Romanowski B., Sutherland R., Flick G.H. et al. // Ann. Med. -1991. - V. 114. - P. 1005-1009.
- Officiële of alternatieve liquidatie: wat te kiezen Juridische ondersteuning bij de liquidatie van een bedrijf - de prijs van onze diensten is lager dan mogelijke verliezen
- Wie kan lid zijn van de vereffeningscommissie Vereffenaar of vereffeningscommissie wat is het verschil
- Faillissement beveiligde schuldeisers - zijn privileges altijd goed?
- Het werk van de contractmanager wordt wettelijk betaald De werknemer weigert de voorgestelde combinatie